| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-32页 |
| 1 梨遗传转化研究进展 | 第14-20页 |
| ·梨遗传转化的主要进展 | 第14-15页 |
| ·影响梨遗传转化的主要因素 | 第15-19页 |
| ·受体系统 | 第15-16页 |
| ·基因型 | 第16页 |
| ·农杆菌的侵染力 | 第16页 |
| ·Vir区基因的活化 | 第16-17页 |
| ·转化细胞的筛选和检测 | 第17页 |
| ·杀菌剂类型和浓度的选择 | 第17-18页 |
| ·转化过程中外部环境的控制 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19-20页 |
| ·进一步建立一个稳定、高效的再生和转化体系,扩大品种研究范围 | 第19页 |
| ·积极探索更有效的遗传转化方法 | 第19页 |
| ·加快同经济性状相关的目的基因的分离与克隆 | 第19-20页 |
| ·加强梨转基因生物安全性问题的评估 | 第20页 |
| 2 果实褐变的研究进展 | 第20-26页 |
| ·果实褐变的分类 | 第20页 |
| ·酶促褐变发生的条件 | 第20-21页 |
| ·多酚氧化酶的研究进展 | 第21-24页 |
| ·PPO基因的遗传学特征 | 第21-23页 |
| ·多基因家族性 | 第21页 |
| ·序列的保守性 | 第21-22页 |
| ·没有内含子 | 第22页 |
| ·表达大多经过翻译后的加工过程 | 第22页 |
| ·时空表达的特异性 | 第22-23页 |
| ·PPO基因的分子结构 | 第23页 |
| ·植物中PPO酶的有关催化机理和催化理论的提出 | 第23-24页 |
| ·半胱氨酸抑制酶促褐变的机理 | 第23页 |
| ·PPO的自杀性抑制理论 | 第23-24页 |
| ·PPO的"动力学协作(kinetic synergism)"机制 | 第24页 |
| ·植物组织中PPO酶活性的影响因素 | 第24页 |
| ·控制果实酶促褐变的途径 | 第24-25页 |
| ·展望 | 第25-26页 |
| 3 RNAi的研究进展 | 第26-30页 |
| ·RNAi的发现 | 第26-27页 |
| ·RNAi可能的作用机制 | 第27-29页 |
| ·与RNAi作用相关的酶 | 第27页 |
| ·RNAi的作用过程 | 第27-29页 |
| ·转录后基因沉默 | 第28页 |
| ·基因组DNA甲基化 | 第28-29页 |
| ·RNAi在植物品种改良中的应用 | 第29-30页 |
| ·RNAi改良植物品质 | 第29页 |
| ·RNAi改良植物花色 | 第29页 |
| ·RNAi改良植物抗病性 | 第29-30页 |
| ·展望 | 第30页 |
| 4 立题依据 | 第30-32页 |
| 第二章 叶片生理状态和抗生素对‘丰水'梨组培苗叶片再分化的影响 | 第32-42页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| ·供试材料 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·叶片生理状态对‘丰水'梨叶片再生不定芽的影响 | 第32-33页 |
| ·继代培养基对‘丰水'梨组培苗生长发育的影响 | 第33页 |
| ·继代培养基对‘丰水'梨叶片再生不定芽的影响 | 第33页 |
| ·继代培养天数对‘丰水'梨叶片再生不定芽的影响 | 第33页 |
| ·三种杀菌剂对‘丰水'梨叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响 | 第33-34页 |
| ·卡那霉素对‘丰水'梨叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响 | 第34页 |
| ·培养条件 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-38页 |
| ·‘丰水'梨继代培养基对组培苗生长发育的影响 | 第34-35页 |
| ·继代培养基对‘丰水'梨叶片再生不定芽的影响 | 第35-36页 |
| ·继代培养天数对‘丰水'梨叶片再生不定芽的影响 | 第36页 |
| ·三种杀菌剂对‘丰水'梨叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响 | 第36-37页 |
| ·卡那霉素对‘丰水'梨叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-42页 |
| ·叶片生理状态对‘丰水'梨叶片不定芽再生的影响 | 第38-39页 |
| ·三种杀菌剂对‘丰水'梨叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响 | 第39-40页 |
| ·卡那霉素对‘丰水'梨叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响 | 第40-42页 |
| 第三章 农杆菌介导的‘丰水'梨遗传转化体系的优化 | 第42-54页 |
| 1.材料与方法 | 第42-46页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·供试砂梨品种 | 第42页 |
| ·载体与菌株 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·菌株保存 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·农杆菌的培养、活化 | 第44页 |
| ·三种杀菌剂对农杆菌的影响 | 第44页 |
| ·农杆菌浸染浓度的确定 | 第44页 |
| ·农杆菌浸染时间的确定 | 第44页 |
| ·共培养时间的确定 | 第44页 |
| ·AS的添加方式的确定 | 第44-45页 |
| ·含AS悬浮液的pH值 | 第45页 |
| ·卡那霉素选择压的确定 | 第45页 |
| ·GUS瞬时染色 | 第45页 |
| ·培养条件 | 第45-46页 |
| 2.结果与分析 | 第46-50页 |
| ·三种杀菌剂对根癌农杆菌的影响 | 第46页 |
| ·农杆菌浸染浓度的确定 | 第46-47页 |
| ·农杆菌浸染时间的确定 | 第47-48页 |
| ·共培养时间的确定 | 第48页 |
| ·AS的添加方式的确定 | 第48-49页 |
| ·含AS悬浮液的pH值的确定 | 第49页 |
| ·卡那霉素选择压的确定 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-54页 |
| ·三种杀菌剂对农杆菌的影响 | 第50-51页 |
| ·菌液浓度和浸染时间对‘丰水'梨遗传转化的影响 | 第51页 |
| ·共培养时间对‘丰水'梨遗传转化的影响 | 第51页 |
| ·乙酰丁香酮的添加方式对‘丰水'梨遗传转化的影响 | 第51-52页 |
| ·pH值对‘丰水'梨遗传转化的影响 | 第52页 |
| ·卡那霉素选择压的确定 | 第52-54页 |
| 第四章 ‘丰水'梨转基因植株的获得与检测 | 第54-64页 |
| 1 材料与方法 | 第54-60页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·转化外植体(见第三章1.1.1) | 第54页 |
| ·检测植株 | 第54页 |
| ·载体与菌株(见第三章1.1.2) | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-55页 |
| ·菌株保存(见第三章1.1.4) | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·溶液配制 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·农杆菌的培养、活化 | 第56页 |
| ·转化 | 第56页 |
| ·抗性植株的获得 | 第56页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第56-57页 |
| ·PCR检测 | 第57-58页 |
| ·‘丰水'梨基因组DNA的提取 | 第57页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR检测 | 第58-60页 |
| ·‘丰水'梨RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·总RNA的完整性及纯度检测 | 第59页 |
| ·cDNA合成 | 第59页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第59-60页 |
| ·多酚氧化酶(PPO)活性测定 | 第60页 |
| ·酶粗提液的获得 | 第60页 |
| ·多酚氧化酶(PPO)活性测定 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-62页 |
| ·‘丰水'梨转基因植株的获得 | 第60页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第60页 |
| ·PCR检测 | 第60-61页 |
| ·RT-PCR检测 | 第61-62页 |
| ·多酚氧化酶(PPO)活性测定 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 全文结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 附录 | 第78-92页 |
| 附录1:苹果PPO基因与砂梨PPO基因序列比对 | 第80-86页 |
| 附录2:目的基因和载体 | 第86-88页 |
| 附录3:图版 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
