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真核翻译起始因子eIF3和eIF5的结构生物学研究

致谢第1-6页
中文摘要第6-8页
英文摘要第8-10页
目录第10-13页
第一章 绪论第13-42页
 §1.1 翻译起始的分子机制第13-19页
  §1.1.1 概述第13-15页
  §1.1.2 43S前起始复合物的形成第15-16页
  §1.1.3 mRNA的激活及其与43S前起始复合物的结合第16-17页
  §1.1.4 在mRNA上的扫描和起始密码子的识别第17-18页
  §1.1.5 起始因子的离去和80S起始复合物的形成第18-19页
 §1.2 真核翻译起始因子的基本性质及其作用第19-20页
 §1.3 最大的真核起始因子eIF3第20-25页
  §1.3.1 亚基组成及亚基间相互作用第20-22页
  §1.3.2 eIF3在翻译起始中的作用机制第22-23页
  §1.3.3 eIF3参与细胞生命活动的调控第23-24页
  §1.3.4 独特的非核心亚基eIF3k第24-25页
  §1.3.5 eIF3的结构研究进展第25页
 §1.4 两个角色的扮演eIF5第25-27页
  §1.4.1 GTP酶激活蛋白eIF5第25-26页
  §1.4.2 支架蛋白eIF5第26-27页
 §1.5 相互作用网络和多因子复合物(MFC)第27-31页
  §1.5.1 翻译起始相互作用网络第27-28页
  §1.5.2 MFC及mini-MFC的功能和组成第28-30页
  §1.5.3 起始因子间的动态相互作用第30-31页
 §1.6 翻译起始因子中的支架蛋白第31-34页
  §1.6.1 支架蛋白的作用及其结构特征第31-33页
  §1.6.2 eIF3和eIF5都是支架蛋白第33-34页
 §1.7 结构生物学研究方法简介第34-42页
  §1.6.1 X射线晶体学和反常散射在其中的应用第34-39页
  §1.6.2 电镜三维重构及单颗粒技术简介第39-42页
第二章 人源eIF3k的晶体学研究第42-62页
 §2.1 材料与方法第42-47页
  §2.1.1 人源eIF3k及其硒代蛋白的表达与纯化第42-43页
  §2.1.2 晶体生长第43页
  §2.1.3 多波长反常散射数据的收集第43-45页
  §2.1.4 衍射数据的处理第45页
  §2.1.5 晶体结构解析第45-46页
  §2.1.6 蛋白序列及结构分析第46-47页
 §2.2 实验结果第47-56页
  §2.2.1 MAD数据收集和处理结果第47-48页
  §2.2.2 结构解析结果第48-49页
  §2.2.3 人源eIF3k的整体结构第49-52页
  §2.2.4 HAM结构域第52-55页
  §2.2.5 WH结构域第55-56页
 §2.3 分析与讨论第56-60页
  §2.3.1 HAM结构域为蛋白—蛋白相互作用提供结合面第56-57页
  §2.3.2 WH结构域在eIF3k中的作用第57-58页
  §2.3.3 eIF3k中保守残基的分布提示了其可能的蛋白结合面第58-60页
 §2.4 小结第60-62页
第三章 酵母eIF5-CTD的晶体学研究第62-82页
 §3.1 材料与方法第62-66页
  §3.1.1 酵母eIF5-CTD重组蛋白的表达与纯化第62页
  §3.1.2 晶体生长第62-63页
  §3.1.3 重原子衍生物的制备第63-64页
  §3.1.4 衍射数据的收集和处理第64页
  §3.1.5 晶体结构解析第64-65页
  §3.1.6 晶体结构分析第65-66页
 §3.2 实验结果第66-77页
  §3.2.1 筛选合适的重原子衍生物第66页
  §3.2.2 衍射数据收集与处理结果第66-69页
  §3.2.3 结构解析结果第69-70页
  §3.2.4 酵母eIF5-CTD的晶体结构概况第70-72页
  §3.2.5 与eIF2B_∈和eIF4GI的C端结构域进行结构比较第72-74页
  §3.2.6 酵母eIF5-CTD的蛋白表面性质第74-76页
  §3.2.7 寡聚体状态分析结果第76-77页
 §3.3 分析与讨论第77-80页
  §3.3.1 含有AA box的eIF5-CTD是非典型的HEAT结构域第77页
  §3.3.2 eIF5-CTD与其结合蛋白的作用表面分析第77-79页
  §3.3.3 酵母eIF5-CTD三聚体——"真实的谎言"?第79-80页
 §3.4 小结第80-82页
第四章 酵母eIF3的初步电镜研究第82-91页
 §4.1 材料与方法第82-87页
  §4.1.1 酵母细胞培养与eIF3的表达第82-83页
  §4.1.2 酵母eIF3的纯化第83-86页
  §4.1.3 电镜样品的制备第86页
  §4.1.4 酵母eIF3的电镜观察第86-87页
 §4.2 实验结果第87-88页
  §4.2.1 酵母eIF3的表达和纯化结果第87页
  §4.2.2 酵母eIF3负染样品的电镜观察结果第87-88页
 §4.3 分析与讨论第88-90页
  §4.3.1 酵母eIF3的表达和纯化条件的优化第88-89页
  §4.3.2 电镜观察结果的分析第89-90页
 §4.4 小结第90-91页
第五章 结论和展望第91-93页
 §5.1 结论第91-92页
 §5.2 展望第92-93页
参考文献第93-106页
附录A.图表索引第106-108页
附录B.英文缩略词对照表第108-110页
发表论文第110-112页
参加的学术会议第112-113页
攻读博士学位期间完成的其他工作第113页

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