| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 前言 | 第8-12页 |
| ·干扰素的研究背景 | 第8-9页 |
| ·蛋白类药物的半衰期延长的方法 | 第9页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母表达目的基因的条件 | 第10-12页 |
| 2 材料与方法 | 第12-26页 |
| ·常用仪器 | 第12-13页 |
| ·质粒,菌株 | 第13页 |
| ·工具酶 | 第13页 |
| ·其他试剂与材料 | 第13-14页 |
| ·主要培养基与溶液的配制 | 第14-18页 |
| ·方法 | 第18-26页 |
| ·含有5个氨基酸接头的白蛋白干扰素的构建 | 第18-19页 |
| ·HSA-5个氨基酸linker-IFNα-2b回收与纯化 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第20页 |
| ·pPIC9K-HSA-IFNα-2b转化感受态细胞 | 第20页 |
| ·pPIC9K-HSA-IFNα-2b的提取 | 第20-21页 |
| ·重组表达质粒转化毕赤酵母 | 第21-22页 |
| ·不同接头的白蛋白干扰素的表达 | 第22-23页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE | 第23页 |
| ·诱导表达产物Western-blot鉴定 | 第23-24页 |
| ·ELISA法测定白蛋白干扰素的表达量 | 第24页 |
| ·蛋白分离纯化及Lowry法测定蛋白浓度 | 第24-25页 |
| ·干扰素效价的测定 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-37页 |
| ·pPIC9K-HSA-IFNα-2b质粒的获得 | 第26-27页 |
| ·pPIC9K-HSA-IFNα-2b转化毕赤酵母 | 第27-28页 |
| ·重组子的诱导表达与SDS-PAGE | 第28-29页 |
| ·重组子表达产物的Western-blotting | 第29-30页 |
| ·诱导过程中的蛋白SDS-PAGE | 第30-31页 |
| ·过单抗层析柱的紫外检测 | 第31-32页 |
| ·纯化后的蛋白SDS-PAGE | 第32-33页 |
| ·Lowry蛋白定量标准曲线 | 第33页 |
| ·HSA-IFNa-2b活性的测定 | 第33-34页 |
| ·测定HSA-IFNa-2b的表达量 | 第34-37页 |
| 4 讨论 | 第37-41页 |
| ·不同接头的白蛋白干扰素研究意义 | 第37-38页 |
| ·线性化质粒电转化 | 第38页 |
| ·ELISA检测人血清白蛋白干扰素的意义 | 第38-39页 |
| ·表达载体的选择 | 第39-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 缩略词表 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 附录 | 第48-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第50页 |
