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Mineirao柱花草抗炭疽病候选基因MSRA的克隆及其序列分析

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-10页
1 前言第10-31页
   ·柱花草的重要性第10-11页
   ·柱花草炭疽病研究进展第11-14页
     ·柱花草炭疽病的主要危害第11-12页
     ·柱花草炭疽病原菌的遗传多态性及流行性研究第12-14页
   ·柱花草抗炭疽病育种进展第14-16页
     ·收集柱花草种质资源培育抗病品种第14页
     ·引种选育第14-15页
     ·辐射育种第15页
     ·杂交育种第15页
     ·细胞工程育种第15页
     ·转基因抗病育种第15-16页
   ·柱花草生物学研究第16-17页
     ·柱花草细胞遗传学研究第16-17页
     ·柱花草细胞生物学研究第17页
   ·柱花草生物技术研究第17-21页
     ·柱花草组织培养第17-18页
     ·柱花草的原生质融合第18页
     ·柱花草遗传转化第18-19页
     ·柱花草分类及分子标记第19-20页
     ·柱花草基因克隆第20-21页
   ·基因克隆技术进展第21-29页
     ·根据特异蛋白分离目的基因第21页
     ·利用核酸探针克隆目的基因第21-22页
     ·基于分子标记技术分离目的基因第22页
     ·根据特异mRNA 分离目的基因第22-25页
     ·利用DNA 插入法分离目的基因第25-26页
     ·染色体步行法分离目的基因第26页
     ·表达序列标签法分离目的基因第26-27页
     ·基因表达系列分析法第27页
     ·酵母双杂合系统第27页
     ·利用基因芯片技术克隆新基因第27-28页
     ·RACE 技术第28-29页
   ·本研究的目的和意义第29-30页
   ·技术路线第30-31页
2 材料和方法第31-47页
   ·植物材料第31页
   ·菌种和质粒第31页
   ·培养基第31页
   ·生化试剂第31-32页
   ·已知DNA 片断SG2950-1(蒋昌顺,2005)第32页
   ·引物第32-33页
   ·主要仪器和设备第33页
   ·MINEIRAO 柱花草叶片总RNA 的提取第33-35页
   ·已知片断SG2950-1 的CDNA 克隆第35-40页
     ·反转录生成cDNA 第一链第35页
     ·反转录产物的检测第35-36页
     ·PCR 反应第36-37页
     ·RT-PCR 产物的切胶回收第37-38页
     ·克隆片断连接T 载体第38页
     ·连接产物转化E. coil JM 109 感受态细胞第38-39页
     ·重组质粒的鉴定第39页
     ·测序及序列分析第39-40页
   ·MSRA 基因3′端未知序列的克隆第40-42页
     ·所用引物第40页
     ·反转录生成cDNA 第一链第40页
     ·PCR 反应第40-42页
     ·将PCR 产物克隆至载体进行测序分析第42页
   ·MSRA 基因5′端未知序列的克隆第42-45页
     ·所用引物第42页
     ·反转录生成cDNA 第一链反应第42-43页
     ·反转录产物的加A 反应第43-44页
     ·PCR 反应第44-45页
     ·将PCR 产物克隆至T-载体进行测序分析第45页
   ·MSRA 基因全长 CDNA 序列的 RT-PCR 克隆第45-47页
     ·引物的设计第45-46页
     ·PCR 反应第46页
     ·将PCR 产物克隆至T-载体进行测序分析第46-47页
   ·数据分析第47页
3 结果与分析第47-61页
   ·MINEIRAO 柱花草叶片总RNA 质量分析第47-48页
   ·反转录CDNA 的质量检测第48页
   ·MSRA 基因的克隆第48-55页
     ·Mineirao 柱花草中已知片断 SG2950-1 的cDNA 克隆第48-49页
     ·MSRA 基因的cDNA 3′端未知序列的克隆第49-51页
     ·MSRA 基因的cDNA 5′端未知序列的克隆第51-52页
     ·3 个片段的cDNA 序列(MSRA-1,MSRA-3′,MSRA-5′)的拼接及其拼接序列的分析第52-53页
     ·MSRA 基因cDNA 全长序列的克隆第53-55页
   ·MSRA 基因所推导的氨基酸序列的功能预测第55-61页
     ·MSRA 基因所推导的氨基酸序列的同源性比较第55-57页
     ·MSRA 基因的蛋白质理化性质分析第57-58页
     ·跨膜区预测第58-59页
     ·MSRA 基因的氨基酸序列的二级结构预测第59-61页
4 讨论第61-64页
   ·MINEIRAO 柱花草叶片总RNA 的提取第61页
   ·MSRA 基因的克隆第61-62页
   ·细胞色素P450 酶系的存在和基本功能第62-64页
     ·细胞色素P450 酶系存在的普遍性第62页
     ·植物细胞色素P450 酶系的基本功能第62-63页
     ·植物细胞色素P450 酶系的可诱导性第63-64页
5 结论第64-65页
参考文献第65-73页
缩略词(ABBREVIATION)第73-75页
附录:硕士期间发表论文情况第75-76页
致谢第76页

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