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马铃薯花青素候选转录激活基因的克隆与分析

摘要第1-4页
Abstract第4-7页
1 前言第7-25页
   ·天然色素概述第7-8页
   ·花青素概述第8-9页
   ·紫色马铃薯概述第9-10页
   ·花色素生物合成的遗传和生物化学第10-16页
   ·花青素转录调控基因的研究现状第16-24页
   ·本研究的目的和意义第24页
   ·本研究的技术路线第24-25页
2 材料与方法第25-42页
   ·材料与试剂第25页
     ·材料第25页
     ·菌种第25页
     ·试剂第25页
     ·仪器设备第25页
   ·紫色马铃薯WD40、MYC、MYB 基因的克隆第25-26页
     ·紫色马铃薯紫皮,紫肉RNA 的提取第25-26页
     ·RNA 电泳检测第26页
   ·引物的设计第26-28页
     ·克隆马铃薯WD40 基因的引物设计第26-27页
     ·克隆马铃薯MYC 基因保守片段的引物设计第27页
     ·马铃薯MYB 基因保守片段引物设计第27-28页
   ·PCR 反应体系的建立第28-34页
     ·马铃薯WD40 基因片段PCR 扩增体系的建立第28-32页
     ·马铃薯MYC2 基因片段PCR 扩增体系的建立第32-33页
     ·马铃薯MYB 基因片段PCR 扩增体系的建立第33-34页
   ·目的基因的克隆与测序第34-38页
     ·目的片段的回收第34-35页
     ·目的片段与T 载体的连接第35页
     ·大肠杆菌感受态的制备第35页
     ·大肠杆菌感受态的检测和转化方法第35-36页
     ·小量提取质粒(《分子克隆实验指南》2002)第36-37页
     ·聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA第37-38页
     ·重组子的酶切鉴定第38页
     ·重组子的保存及测序第38页
     ·测序第38页
   ·核酸序列分析第38-39页
     ·基于Blastn 软件的核酸同源性分析第38页
     ·cDNA 序列开放阅读框分析第38-39页
   ·蛋白质功能预测第39页
     ·基于Blastx 软件的蛋白质同源性分析第39页
     ·蛋白质的结构功能域分析第39页
   ·候选基因及片段的RT-PCR 表达分析第39-42页
3 结果与分析第42-67页
   ·紫色马铃薯WD40 基因的克隆第42-53页
     ·WD40 基因保守区域的克隆第42页
     ·测序结果及序列分析第42-43页
     ·马铃薯stwd40 基因cDNA 片段3’端的克隆第43-45页
     ·马铃薯stwd40 基因cDNA 片段5’端的克隆第45-47页
     ·马铃薯stwd40 基因阅读框架分析第47-50页
     ·蛋白质功能预测第50-53页
   ·紫色马铃薯STMYC2 基因的克隆第53-63页
     ·马铃薯stmyc2 基因保守区域的克隆第53-55页
     ·测序结果及序列分析第55-63页
   ·紫色马铃薯MYB基因的克隆第63-67页
     ·马铃薯myb 基因保守区域的克隆第63-64页
     ·测序结果及序列分析第64-65页
     ·蛋白质功能预测第65-67页
4. 紫色马铃薯花青素候选调控基因的表达第67-76页
   ·紫色马铃薯不同组织RNA 的提取第67-68页
   ·RT-PCR 分析候选调控基因的表达模式第68-76页
     ·候选基因在黄色马铃薯中的对照实验第73-76页
5 讨论第76-78页
6 结论第78-79页
7 参考文献第79-83页
8 致谢第83页

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