| 提要 | 第1-11页 |
| 缩略词索引表 | 第11-16页 |
| 绪论 | 第16-59页 |
| 一、MAPK信号通路 | 第16-26页 |
| 1. MAPK信号通路的命名 | 第16-17页 |
| 2. MAPK信号转导途径及活化 | 第17-22页 |
| ·MAPK细胞外信号转导 | 第17-18页 |
| ·G蛋白偶联受体信号转导 | 第18-22页 |
| 3. 小G蛋白 | 第22-26页 |
| ·定义 | 第22页 |
| ·共性 | 第22-24页 |
| ·小G蛋白亚类各性 | 第24-26页 |
| 二、Rac1及其激活因子Tiam1 | 第26-49页 |
| 1. Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1) | 第26-44页 |
| ·Rac1基因 | 第26页 |
| ·Rac1的功能结构域 | 第26-28页 |
| ·Rac1的下游效应分子 | 第28-29页 |
| ·Rac/GDI活性调节 | 第29-31页 |
| ·Rac1的生物活性 | 第31-41页 |
| ·Rac1与恶性肿瘤 | 第41-44页 |
| 2. Rac1的GEF: T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1) | 第44-49页 |
| ·Tiam1的结构、功能及分布 | 第44-45页 |
| ·Tiam1促进肿瘤细胞侵袭转移的机制 | 第45-48页 |
| ·Tiam1在侵袭转移肿瘤中的表达 | 第48-49页 |
| ·Tiam1的临床应用价值 | 第49页 |
| 三、肿瘤的微转移 | 第49-57页 |
| 1. 微转移定义 | 第49-51页 |
| 2. 微转移的临床意义 | 第51-53页 |
| 3. 微转移检测的策略与方法 | 第53页 |
| 4. 微转移的肿瘤标志 | 第53-54页 |
| 5. 微转移诊断方法的新进展 | 第54-57页 |
| 四、研究目的、意义与技术路线 | 第57-59页 |
| 第一部分 胃癌淋巴结微转移的检测及临床意义 | 第59-83页 |
| 一、材料与方法 | 第59-67页 |
| 1. 材料 | 第59-60页 |
| ·试剂 | 第59-60页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| ·实验对象 | 第60页 |
| 2. 实验方法 | 第60-67页 |
| ·胃癌及淋巴结总RNA的提取 | 第60-61页 |
| ·RT-PCR扩增CK18目的片段 | 第61-62页 |
| ·CK18重组质粒的构建与鉴定 | 第62-65页 |
| ·CK18 RTFQ-PCR标准曲线的建立及定量检测 | 第65-67页 |
| 3. 统计学处理 | 第67页 |
| 二、结果 | 第67-74页 |
| 1. CK18基因载体克隆的构建 | 第67-70页 |
| ·胃癌和淋巴结CK18 cDNA的琼脂糖凝胶电泳图 | 第67-68页 |
| ·CK18的TA克隆及鉴定结果 | 第68-70页 |
| 2. CK18 mRNA RTFQ-PCR分析 | 第70-73页 |
| ·CK18重组质粒RTFQ-PCR荧光域值与标准曲线 | 第70-72页 |
| ·RTFQ-PCR检测CK18的可重复性和敏感性 | 第72-73页 |
| 3. RTFQ-PCR检测胃癌淋巴结微转移 | 第73-74页 |
| ·三种方法检测胃癌淋巴结转移的阳性率 | 第73页 |
| ·胃癌淋巴结CK18表达水平与分组 | 第73-74页 |
| 三、讨论 | 第74-83页 |
| 1. RTFQ-PCR方法的选择与应用 | 第74-80页 |
| ·RTFQ-PCR技术的选择 | 第74-76页 |
| ·TaqMan探针技术的应用 | 第76-79页 |
| ·RTFQ-PCR的优缺点及对策 | 第79-80页 |
| 2. RTFQ-PCR检测胃癌淋巴结的微转移 | 第80-83页 |
| ·胃癌微转移标志物CK18 | 第80页 |
| ·胃癌淋巴结微转移 | 第80-82页 |
| ·胃癌淋巴结微转移的临床意义 | 第82-83页 |
| 第二部分 胃癌Tiam1表达及其临床病理意义 | 第83-106页 |
| 一、材料与方法 | 第83-91页 |
| 1. 材料 | 第83-85页 |
| ·试剂 | 第83-84页 |
| ·仪器 | 第84页 |
| ·实验对象 | 第84-85页 |
| 2. 实验方法 | 第85-91页 |
| ·胃癌、癌旁及胃良性病变组织总RNA的提取 | 第85页 |
| ·RT-PCR扩增Tiam1基因 | 第85-87页 |
| ·Tiam1重组质粒的构建与鉴定 | 第87-90页 |
| ·Tiam1标准品的制备、标准曲线绘制及定标 | 第90-91页 |
| ·RTFQ-PCR方法检测三种胃病变组织的Tiam1表达 | 第91页 |
| 3. 统计学处理 | 第91页 |
| 二、结果 | 第91-100页 |
| 1. Tiam1重组质粒的琼脂糖凝胶电泳图 | 第91-92页 |
| 2. Tiam1重组质粒测序图谱 | 第92页 |
| 3. Tiam1标准品荧光域值 | 第92-93页 |
| 4. Tiam1重组质粒RTFQ-PCR标准曲线及Ct值 | 第93-94页 |
| 5. 胃癌、癌旁及胃良性病变组织Tiam1 RTFQ-PCR扩增曲线图 | 第94页 |
| 6. 胃癌、癌旁组织及胃良性病变Tiam1的RTFQ-PCR定量结果 | 第94-97页 |
| 7. 胃癌组织Tiam1 mRNA量值水平与临床病理学特征的关系 | 第97-98页 |
| 8. 三种胃病变组织Tiam1 mRNA表达阳性率 | 第98页 |
| 9. 两种胃病变组织Tiam1 mRNA表达量值水平 | 第98-99页 |
| 10. Tiam1 mRNA表达水平与胃癌淋巴结微转移和转移的关系 | 第99-100页 |
| 三、讨论 | 第100-106页 |
| 1. Tiam1生物学作用及检测方法 | 第100-101页 |
| 2. 胃癌Tiam1高水平表达的临床病理意义 | 第101-104页 |
| 3. 胃癌Tiam1高水平表达的病因学意义 | 第104-106页 |
| 第三部分 胃癌Rac1超表达及突变的病因学意义 | 第106-128页 |
| 一、材料与方法 | 第106-111页 |
| 1. 材料 | 第106-107页 |
| ·试剂 | 第106-107页 |
| ·仪器 | 第107页 |
| ·实验对象 | 第107页 |
| 2. 实验方法 | 第107-111页 |
| ·RT-PCR扩增胃癌、癌旁及胃良性病变组织Rac1基因 | 第107-109页 |
| ·琼脂糖电泳检测胃癌、癌旁及胃良性病变组织Rac1 PCR产物 | 第109-110页 |
| ·PCR-SSCP检测胃癌Rac1基因突变 | 第110-111页 |
| 3. 统计学处理 | 第111页 |
| 二、结果 | 第111-119页 |
| 1. 三种胃病变组织Rac1基因RT-PCR扩增产物琼脂糖电泳 | 第111-112页 |
| 2. 胃癌组织Rac1测序结果分析 | 第112-114页 |
| ·胃癌Rac1 RT-PCR扩增片段序列分析图谱 | 第112-113页 |
| ·胃癌组织Rac1测序结果及与Genbank序列的比较 | 第113-114页 |
| 3. 三种胃病变组织Rac1基因表达阳性率 | 第114页 |
| 4. 胃癌Rac1表达与临床病理的关系 | 第114-115页 |
| 5. 胃癌Rac1表达水平与临床TNM分期的关系 | 第115-116页 |
| 6. 三种胃病变组织中Rac1与Tiam1表达阳性率 | 第116-117页 |
| 7. 胃癌组织Tiam1和Rac1表达水平的相关性 | 第117页 |
| 8. Rac1表达水平与胃癌淋巴结微转移及转移的关系 | 第117-118页 |
| 9. Rac1表达水平与胃癌淋巴结微转移的相关性 | 第118-119页 |
| 10. PCR-SSCP显示胃癌组织中的Rac1基因突变 | 第119页 |
| 三、讨论 | 第119-128页 |
| 1. 胃癌Rac1表达水平定量分析的临床病理意义 | 第119-120页 |
| 2. 胃癌Rac1和Tiam1表达水平定量分析的生物学意义 | 第120-122页 |
| 3. Tiam1-Rac1信号途径异常对转录激活的作用 | 第122-124页 |
| 4. 胃癌Rac1基因的组成型活化与胃癌病因学假说 | 第124-128页 |
| 结论 | 第128-132页 |
| 参考文献 | 第132-145页 |
| 攻博期间发表的论文、专著和获奖情况 | 第145-148页 |
| 中文摘要 | 第148-153页 |
| 英文摘要 | 第153-160页 |
| 致谢 | 第160页 |
