| 第一章 绪论 | 第1-21页 |
| ·茶氨酸研究的历史与现状 | 第12-13页 |
| ·茶氨酸体内生物合成途径 | 第13-14页 |
| ·茶氨酸的生理功能研究与开发利用前景 | 第14-17页 |
| ·茶氨酸制备技术的研究 | 第17-20页 |
| ·提取分离技术 | 第17页 |
| ·化学合成技术 | 第17-18页 |
| ·组织培养技术 | 第18-19页 |
| ·微生物发酵技术 | 第19-20页 |
| ·茶氨酸测定方法 | 第20-21页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第21-24页 |
| ·实验目的 | 第21-22页 |
| ·本实验的主要内容 | 第22页 |
| ·9种微生物催化合成茶氨酸能力的测定 | 第22页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶基因的克隆 | 第22页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶的诱导表达研究 | 第22页 |
| ·重组菌催化合成茶氨酸反应条件优化 | 第22页 |
| ·技术路线 | 第22-24页 |
| ·9种微生物催化合成茶氨酸能力的测定 | 第22页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶基因的克隆、表达 | 第22-23页 |
| ·重组菌催化合成茶氨酸反应条件优化 | 第23-24页 |
| 第三章 9种微生物催化合成茶氨酸能力的测定 | 第24-33页 |
| ·材料和试剂 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·9微生物生长曲线制作方法 | 第25-26页 |
| ·菌体收集方法 | 第26页 |
| ·催化合成茶氨酸反应方法 | 第26页 |
| ·茶氨酸测定方法 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·9微生物生长曲线制作 | 第27-30页 |
| ·茶氨酸标样HPLC检测标准曲线制作 | 第30-31页 |
| ·9种微生物催化合成茶氨酸能力测定 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第四章 大肠杆菌DH5A中Г-谷氨酰转肽酶基因的克隆 | 第33-46页 |
| ·材料和试剂 | 第33-35页 |
| ·实验方法 | 第35-40页 |
| ·引物的设计与合成 | 第35-36页 |
| ·以菌液为模板进行PCR扩增 | 第36页 |
| ·PCR产物的回收 | 第36页 |
| ·目的片断和载体双酶切 | 第36-37页 |
| ·低融点胶电泳回收酶切的目的片断和载体并进行产物纯化 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·BL21感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第38页 |
| ·碱法小批量抽提质粒DNA | 第38-39页 |
| ·核酸电泳 | 第39页 |
| ·重组质粒的双酶切验证 | 第39页 |
| ·重组质粒的PCR验证 | 第39-40页 |
| ·基因序列测定 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-45页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶基因的PCR扩增 | 第40页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶基因表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·重组质粒的双酶切验证 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的PCR验证 | 第43页 |
| ·基因序列测定 | 第43-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第五章 Г-谷氨酰转肽酶的诱导表达研究 | 第46-53页 |
| ·材料和试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·重组菌生长曲线制作方法 | 第47页 |
| ·不同诱导剂浓度优化实验 | 第47-48页 |
| ·不同诱导温度优化实验 | 第48页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第48页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶活性检测 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·重组菌生长曲线制作 | 第49-50页 |
| ·不同诱导剂浓度优化实验结果 | 第50页 |
| ·不同诱导温度优化实验结果 | 第50-51页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| ·γ-谷氨酰转肽酶活性检测 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第六章 重组菌催化合成茶氨酸反应条件优化 | 第53-60页 |
| ·材料和试剂 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·不同菌量优化实验 | 第53页 |
| ·不同pH优化实验 | 第53页 |
| ·不同底物浓度优化实验 | 第53-54页 |
| ·不同反应时间优化实验 | 第54页 |
| ·对照处理 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-58页 |
| ·不同菌量优化实验结果 | 第54-55页 |
| ·不同pH优化实验结果 | 第55-56页 |
| ·不同底物浓度优化实验结果 | 第56-57页 |
| ·不同反应时间优化实验结果 | 第57-58页 |
| ·对照处理结果 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第七章 讨论与总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |