| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第10页 |
| ·碱性蛋白酶的来源 | 第10-11页 |
| ·碱性蛋白酶的性质 | 第11-12页 |
| ·最佳pH及温度 | 第11-12页 |
| ·分子量 | 第12页 |
| ·激活剂与抑制剂 | 第12页 |
| ·碱性蛋白酶的作用机制 | 第12页 |
| ·碱性蛋白酶的应用 | 第12-14页 |
| ·清洁剂行业 | 第12-13页 |
| ·皮革工业 | 第13页 |
| ·银的回收 | 第13页 |
| ·医药和化妆品 | 第13页 |
| ·食品工业 | 第13-14页 |
| ·废物处理 | 第14页 |
| ·化学工业 | 第14页 |
| ·碱性蛋白酶的基因工程、蛋白质工程以及发酵工程的研究 | 第14-15页 |
| ·碱性蛋白酶的基因工程 | 第14-15页 |
| ·碱性蛋白酶的蛋白质工程 | 第15页 |
| ·碱性蛋白酶的发酵工程 | 第15页 |
| ·海洋微生物天然活性物质的研究 | 第15-18页 |
| ·海洋微生物天然活性物质 | 第15-16页 |
| ·海洋微生物酶 | 第16页 |
| ·海洋细菌资源 | 第16页 |
| ·海洋细菌碱性蛋白酶 | 第16-18页 |
| ·存在的问题与展望 | 第18-19页 |
| ·选题的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-28页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-28页 |
| ·产蛋白酶的海洋细菌的筛选 | 第20-21页 |
| ·酶活力的测定 | 第21页 |
| ·细菌鉴定 | 第21-22页 |
| ·发酵条件研究 | 第22-23页 |
| ·酶的分离纯化 | 第23页 |
| ·酶性质研究 | 第23-25页 |
| ·碱性蛋白酶基因的克隆 | 第25-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-55页 |
| ·产蛋白酶的海洋细菌的筛选 | 第28-30页 |
| ·海洋细菌的分离 | 第28页 |
| ·碱性蛋白酶产生菌的初筛 | 第28-29页 |
| ·碱性蛋白酶产生菌的复筛 | 第29-30页 |
| ·菌株鉴定结果 | 第30-34页 |
| ·常规鉴定 | 第30-32页 |
| ·16SrDNA鉴定 | 第32-33页 |
| ·细菌鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·发酵条件研究 | 第34-39页 |
| ·发酵时间对细菌生长和产酶的影响 | 第34页 |
| ·不同碳源对细菌生长和产酶的影响 | 第34页 |
| ·不同氮源对细菌生长和产酶的影响 | 第34-35页 |
| ·碳源和氮源的配比对细菌生长和产酶的影响 | 第35页 |
| ·无机盐离子对细菌生长和产酶的影响 | 第35-36页 |
| ·培养基初始pH对细菌生长和产酶的影响 | 第36-37页 |
| ·装液量对细菌生长和产酶的影响 | 第37页 |
| ·摇床转速对细菌生长和产酶的影响 | 第37页 |
| ·培养温度对细菌生长和产酶的影响 | 第37-38页 |
| ·接种量对细菌生长和产酶的影响 | 第38页 |
| ·转接培养次数对细菌生长和产酶的影响 | 第38-39页 |
| ·酶的分离纯化 | 第39-41页 |
| ·硫酸按分级沉淀 | 第39页 |
| ·阴离子柱分离 | 第39-40页 |
| ·分子凝胶柱分离 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第40-41页 |
| ·酶的各步纯化结果 | 第41页 |
| ·酶性质研究 | 第41-47页 |
| ·酶反应最适温度 | 第41-42页 |
| ·酶作用最适pH | 第42页 |
| ·酶的热稳定性 | 第42-43页 |
| ·测定反应底物、酶浓度、pH、温度四种因素对酶活性的影响 | 第43-44页 |
| ·酶的分子量测定 | 第44页 |
| ·酶的等电点测定 | 第44页 |
| ·酶的米氏常数测定 | 第44-45页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第45-46页 |
| ·蛋白酶抑制剂对酶活性的影响 | 第46页 |
| ·变性剂对酶活性的影响 | 第46-47页 |
| ·碱性蛋白酶基因克隆 | 第47-55页 |
| ·PCR扩增 | 第47页 |
| ·克隆 | 第47-48页 |
| ·测序及序列分析 | 第48-49页 |
| ·进化树构建 | 第49-55页 |
| 4 小结 | 第55-57页 |
| 5 问题与讨论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录1 试剂与培养基配制 | 第67-75页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间撰写的论文 | 第75-76页 |
| 附录3 攻读硕士学位期间登录的序列 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |