| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 第一部分 研究动态 | 第9-20页 |
| 一.前言 | 第9-18页 |
| 1.犬细小病毒的生物学特性 | 第9-11页 |
| ·形态特点 | 第9页 |
| ·理化性质 | 第9-10页 |
| ·血凝性 | 第10页 |
| ·抗原性 | 第10-11页 |
| 2.犬细小病毒的基因组结构及其编码的蛋白质 | 第11-12页 |
| ·基因组结构特点 | 第11-12页 |
| ·编码的蛋白质 | 第12页 |
| 3.犬细小病毒的衣壳结构及其功能区 | 第12-14页 |
| ·衣壳结构特点 | 第12-13页 |
| ·衣壳结构功能区 | 第13-14页 |
| 4.流行病学及致病机理 | 第14-15页 |
| ·流行病学 | 第14页 |
| ·致病机理 | 第14-15页 |
| 5.发病的临床表现及其病理变化 | 第15页 |
| ·出血性肠炎型 | 第15页 |
| ·心肌病变型 | 第15页 |
| ·肺病变型 | 第15页 |
| 6.犬细小病毒疫苗的开发研制 | 第15-17页 |
| ·同源灭活苗 | 第15页 |
| ·同源弱毒苗 | 第15-16页 |
| ·新型疫苗的研究状况 | 第16-17页 |
| 7.犬细小病毒的诊断检测 | 第17-18页 |
| ·电镜诊断 | 第17页 |
| ·血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI) | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第17页 |
| ·聚合酶链反应技术(PCR) | 第17-18页 |
| ·其它 | 第18页 |
| 二.研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二部分 实验研究 | 第20-46页 |
| 第1章 犬细小病毒VP_2基因的克隆及其原核表达载体的构建 | 第20-32页 |
| 1.材料 | 第20-21页 |
| ·质粒、菌株和毒株 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| 2.方法 | 第21-25页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·病毒基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·PCR扩增及其产物的纯化回收 | 第21-22页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第22-24页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·序列测定和蛋白质特性的分析 | 第25页 |
| 3.结果与分析 | 第25-30页 |
| ·病毒基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·VP_2基因的PCR扩增 | 第26页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·序列测定和蛋白质特性的分析 | 第28-30页 |
| 4.讨论 | 第30-32页 |
| ·酶切位点的设计 | 第30页 |
| ·影响PCR扩增因素的探讨 | 第30页 |
| ·目的基因的选择 | 第30-31页 |
| ·表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 第2章 犬细小病毒VP_2基因的原核表达及其产物的纯化鉴定 | 第32-46页 |
| 1.材料 | 第32页 |
| ·质粒与菌株 | 第32页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| 2.方法 | 第32-36页 |
| ·VP_2基因的密码子分析 | 第33页 |
| ·重组质粒在不同宿主菌中的诱导表达 | 第33页 |
| ·重组质粒表达条件的优化 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第34页 |
| ·目的蛋白的纯化与复性 | 第34-35页 |
| ·间接ELISA反应条件的确立 | 第35-36页 |
| 3.结果与分析 | 第36-43页 |
| ·VP_2基因的密码子分析 | 第36-37页 |
| ·重组质粒在不同宿主菌中的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·重组质粒表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第39页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·间接ELISA反应条件的确立 | 第40-43页 |
| 4.讨论 | 第43-46页 |
| ·影响原核表达的因素 | 第43页 |
| ·表达系统的选择 | 第43-44页 |
| ·关于包涵体的变性溶解 | 第44页 |
| ·关于目的蛋白的纯化复性 | 第44-45页 |
| ·表达产物的活性鉴定 | 第45-46页 |
| 全文总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |