| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 第一部分 同源异型框基因(homeobox genes)简介 | 第11页 |
| 第二部分 Pem基因研究进展 | 第11-16页 |
| (一) Pem的发现及命名 | 第11页 |
| (二) Pem基因是一个同源异型框基因 | 第11-12页 |
| (三) Pem基因的结构及调控 | 第12-13页 |
| (四) Pem基因的表达及其产物的功能 | 第13-15页 |
| (五) 与Pem蛋白相互作用的分子 | 第15-16页 |
| 第三部分 本课题的基本思路 | 第16页 |
| 第四部分 实验技术路线简图 | 第16-17页 |
| 实验部分 | 第17-42页 |
| 第一部分 实验材料 | 第17-24页 |
| 1.主要实验仪器设备 | 第17-18页 |
| 2 主要试剂 | 第18-24页 |
| 第二部分 实验方法 | 第24-42页 |
| 1.生物信息学分析mPem cDNA序列的密码子组成 | 第24页 |
| 2.构建原核表达载体pET22b(+)～mPem | 第24-31页 |
| ·mPem基因cDNA序列的PCR扩增及双酶切 | 第24-27页 |
| ·pET22b(+)质粒的氯霉素扩增、抽提及双酶切 | 第27-28页 |
| ·双酶切片段的连接 | 第28页 |
| ·E.coli DH5 a感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接液转化E.coli DH5 a感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·pET22b(+)-mPem重组子的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| 3.mPem-6His蛋白的在重组菌中的诱导表达 | 第31-37页 |
| ·重组菌的生长曲线 | 第31-33页 |
| ·pET22b(+)-mPem/pET22b(+)质粒转化大肠杆菌Rosetta ~(TM)2(DE3) | 第32-33页 |
| ·重组菌的生长曲线 | 第33页 |
| ·mPem-6His蛋白在重组菌中的诱导表达 | 第33-36页 |
| ·IPTG诱导时间的筛选 | 第36页 |
| ·诱导时机的选择 | 第36-37页 |
| ·诱导剂IPTG的用量 | 第37页 |
| 4.mPem-6His蛋白的Ni~(2+)亲和纯化 | 第37-40页 |
| ·mPem-6His蛋白的溶解性 | 第37-38页 |
| ·mPem-6His蛋白的小批量纯化 | 第38-39页 |
| ·mPem-6His蛋白的柱纯化 | 第39-40页 |
| 5.多克隆抗血清的制备 | 第40-42页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第40-41页 |
| ·多克隆抗血清的特异性 | 第41-42页 |
| 实验结果 | 第42-52页 |
| 1.生物信息学分析mPem cDNA序列的密码子组成 | 第42-43页 |
| 2.原核表达质粒pET22b(+)-mPem的构建 | 第43-45页 |
| 3.mPem-6His蛋白在重组菌中的诱导表达 | 第45-48页 |
| ·重组菌的生长曲线 | 第45-46页 |
| ·mPem-6His蛋白在重组菌中的诱导表达 | 第46页 |
| ·IPTG诱导时间的筛选 | 第46-47页 |
| ·诱导时机的选择 | 第47-48页 |
| ·诱导剂IPTG的用量 | 第48页 |
| 4.mPem-6His蛋白的Ni~(2+)亲和纯化 | 第48-50页 |
| ·mPem-6His蛋白的溶解性 | 第48-49页 |
| ·mPem-6His蛋白的小批量纯化 | 第49-50页 |
| ·mPem-6His蛋白的柱纯化 | 第50页 |
| 5.多克隆抗血清的制备 | 第50-52页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗血清的特异性 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-55页 |
| 1.蛋白表达系统的选择 | 第52-54页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第52页 |
| ·大肠杆菌表达菌株的选择 | 第52-54页 |
| 2.多克隆抗体的制备 | 第54页 |
| 3.多克隆抗体的应用 | 第54-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 附录 | 第59-64页 |
| 附录1 大肠杆菌的密码子使用表 | 第59-60页 |
| 附录2 Genebank公布的mPem的基因全序列 | 第60-62页 |
| 附录3 pET22b(+)-mPem重组子的测序报告 | 第62-63页 |
| 附录4:mPem-6His蛋白在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间参与发表的论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
