| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| ·花色基因工程研究进展 | 第11-15页 |
| ·花卉色素的种类及其显色特征 | 第11-14页 |
| ·种类 | 第11-12页 |
| ·显色特征 | 第12-13页 |
| ·花卉色素的生物合成 | 第13-14页 |
| ·花色基因工程的研究技术 | 第14-15页 |
| ·反义RNA技术 | 第15页 |
| ·共抑制法 | 第15页 |
| ·转入外源基因法 | 第15页 |
| ·花色素合成相关基因 | 第15-18页 |
| ·结构基因 | 第16-17页 |
| ·调节基因 | 第17-18页 |
| ·蓝色花卉研究和F3’5’H基因 | 第18-22页 |
| ·蓝色花卉形成原因 | 第18-19页 |
| ·蓝色花色素 | 第18页 |
| ·助色素 | 第18-19页 |
| ·较高的液泡pH | 第19页 |
| ·蓝色花卉分子育种的主要途径 | 第19-22页 |
| ·编码翠雀素的关键基因 | 第19-20页 |
| ·F3’5’H基因 | 第20-22页 |
| ·花器官特异表达启动子研究进展 | 第22-24页 |
| ·花器官特异表达启动子 | 第23-24页 |
| ·UBC6基因启动子 | 第23页 |
| ·与苯丙酮(phenylpropanoid)代谢有关的3个基因的启动子 | 第23页 |
| ·NOS(NoPALine Synthase)基因启动子 | 第23-24页 |
| ·OsChial:175基因启动子 | 第24页 |
| ·DOMADS 1基因启动子 | 第24页 |
| ·FPS 2基因启动子 | 第24页 |
| ·菊花转基因研究进展 | 第24-25页 |
| ·转入选择报告基因 | 第24-25页 |
| ·转入色素调节基因 | 第25页 |
| ·转入提高抗性的基因 | 第25页 |
| ·转入改变株形的基因 | 第25页 |
| ·外源基因的稳定性 | 第25页 |
| ·研究的意义和目的 | 第25-27页 |
| 第二章 瓜叶菊F3’5’H基因克隆 | 第27-38页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·供试材料 | 第27页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·酶与试剂盒 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-33页 |
| ·瓜叶菊的RNA提取 | 第27-28页 |
| ·RNA检测 | 第28页 |
| ·逆转录 | 第28-29页 |
| ·PCR引物设计 | 第29页 |
| ·PCR扩增反应 | 第29页 |
| ·切胶回收目的基因片段 | 第29-30页 |
| ·将回收的目的基因片段连接到pMD 18-T Vector上 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第31页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·穿刺培养及菌落PCR检测 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·瓜叶菊 RNA提取 | 第33页 |
| ·瓜叶菊F3’5’H基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·菌落PCR检测 | 第34页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·测序前的菌落PCR鉴定 | 第35页 |
| ·测序结果 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| ·F3’5’H同源基因的结构分析 | 第35-38页 |
| 第三章. 花特异表达启动子PchsA的克隆 | 第38-45页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·供试材料 | 第38页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·酶与试剂盒 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·矮牵牛基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增启动子PchsA | 第39-40页 |
| ·切胶回收目的基因片段 | 第40页 |
| ·将回收的目的基因片段克隆到pMD 18-T vector上 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第40页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第40页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·穿刺培养及菌落PCR检测 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-43页 |
| ·矮牵牛DNA提取结果 | 第40页 |
| ·PCR扩增启动子PchsA | 第40-41页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第41页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·测序前的菌落PCR鉴定 | 第42页 |
| ·测序结果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·植物 DNA提取 | 第43-44页 |
| ·启动子PCHSA的克隆 | 第44-45页 |
| 第四章 载体构建及转化菊花 | 第45-56页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·菊花材料 | 第45页 |
| ·酶与试剂盒 | 第45页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·F3’5’H基因和PchsA启动子的克隆和连接 | 第45-47页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·目的基因的扩增 | 第45-46页 |
| ·F3’5’H基因和PchsA启动子的连接 | 第46页 |
| ·连接产物的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·植物表达载体pBI-F3’5’H的构建及检测 | 第47-48页 |
| ·表达载体pBI-F3’5’H的构建 | 第47页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第47-48页 |
| ·表达载体pBI-F3’5’H的菌落PCR及酶切检测 | 第48页 |
| ·表达载体pBI-F3’5’H转化根癌农杆菌 | 第48-50页 |
| ·培养基配方的设计 | 第48-49页 |
| ·无菌苗的获得 | 第49页 |
| ·农杆菌的培养 | 第49页 |
| ·菊花抗性培养基筛选 | 第49页 |
| ·浸染时间对菊花抗性愈伤率的影响 | 第49-50页 |
| ·诱导愈伤组织 | 第50页 |
| ·愈伤组织继代 | 第50页 |
| ·转基因菊花的检测 | 第50-51页 |
| ·PCR检测 | 第50-51页 |
| ·结果和分析 | 第51-55页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第51-53页 |
| ·F3’5’H和PchsA的克隆 | 第51页 |
| ·连接产物PCR扩增后的检测 | 第51-52页 |
| ·pBI 121的酶切 | 第52页 |
| ·重组载体的菌落PCR检测 | 第52页 |
| ·载体双酶切检测 | 第52-53页 |
| ·菊花转化体系的优化 | 第53-54页 |
| ·菊花抗性压力的筛选 | 第53页 |
| ·浸染时间对菊花抗性愈伤率的影响 | 第53页 |
| ·共培养时间对菊花抗性愈伤率的影响 | 第53-54页 |
| ·转化菊花的培养 | 第54页 |
| ·转化菊花的检测 | 第54-55页 |
| ·PCR检测 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·叶盘法转化 | 第55页 |
| ·转化与再生 | 第55-56页 |
| 第五章 总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
