| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 英文缩写 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-28页 |
| 1.阿维链霉菌研究概况 | 第13页 |
| 2.阿维菌素和伊维菌素的应用及安全性 | 第13-15页 |
| 3.阿维菌素的结构类似物和衍生物 | 第15页 |
| 4.S.avermitilis基因组学 | 第15-16页 |
| 5.阿维链霉菌生物合成的分子生物学研究进展 | 第16-20页 |
| 6.寡霉素的概述及寡霉素PKS基因结构及生物合成 | 第20-21页 |
| 7.组合生物合成在聚酮类抗生素中的应用 | 第21-25页 |
| 8.论文的立题依据 | 第25-27页 |
| 9.目的意义 | 第27-28页 |
| 实验材料 | 第28-32页 |
| 1.菌种和质粒 | 第28页 |
| 2.试剂 | 第28-29页 |
| 3.溶液 | 第29-30页 |
| 4.培养基 | 第30-31页 |
| 5.仪器 | 第31-32页 |
| 实验方法 | 第32-38页 |
| 1.大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.大肠杆菌ET12567感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 3.热激转化和阳性克隆筛选 | 第32页 |
| 4.PCR反应 | 第32-33页 |
| 5.DNA电泳 | 第33-34页 |
| 6.DNA酶切和连接 | 第34页 |
| 7.载体的碱性磷酸化处理 | 第34页 |
| 8.DNA测序 | 第34页 |
| 9.菌株的活化 | 第34页 |
| 10.链霉菌总DNA的提取 | 第34-35页 |
| 11.链霉菌质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第35页 |
| 12.重组质粒的接合转移 | 第35-36页 |
| 13.阳性克隆菌株的筛选 | 第36页 |
| 14.摇瓶液体发酵产物的提取 | 第36-37页 |
| ·可维菌素、寡霉素和伊维菌素的检测及发酵单位的HPLC分析 | 第37-38页 |
| 结果与讨论 | 第38-57页 |
| 第一部分 阿维菌素聚酮体合成霉基因的改造 | 第38-46页 |
| 1.在基因文库Milbemycin PKS modular 2中筛选还原酶基因ER | 第38页 |
| 2.PCR扩增带有avermectin PKS modular 2中的AT-DH-KR基因 | 第38页 |
| 3.克隆载体的构建 | 第38-41页 |
| 4.重组质粒的转化 | 第41-42页 |
| 5.基因重组菌株的获得 | 第42-43页 |
| 6.发酵产物的检测 | 第43-44页 |
| 7.取代变株的PCR验证 | 第44页 |
| 8.结论 | 第44-46页 |
| 第二部分 寡霉素合成阻断株的构建及发酵研究 | 第46-57页 |
| 1.olmA2基因和olmA4基因的引物设计 | 第46-47页 |
| 2.PCR反应 | 第47-48页 |
| 3.PCR产物的测序的验证 | 第48-49页 |
| 4.用于olmA基因缺失的重组质粒pZL5的构建 | 第49-52页 |
| 5.接合转移试验 | 第52页 |
| 6.基因重组菌株的获得 | 第52-53页 |
| 7.发酵产物的检测 | 第53-55页 |
| 8.稳定性考察 | 第55页 |
| 9.缺失菌株的PCR验证 | 第55页 |
| 10.讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
