| 论文评阅人和答辩委员会 | 第1-4页 |
| 独创性声明 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-33页 |
| ·植物代谢工程研究进展 | 第12页 |
| ·叶酸研究进展 | 第12-33页 |
| ·叶酸的化学结构与生理功能 | 第12-15页 |
| ·叶酸与人体健康 | 第15-16页 |
| ·植物生物合成的天然叶酸 | 第16-20页 |
| ·叶酸的添加、强化以及人工叶酸的副作用 | 第20-21页 |
| ·植物叶酸的生物合成 | 第21-26页 |
| ·叶酸的测定方法 | 第26-27页 |
| ·酶活性及代谢中间化合物的测定 | 第27-28页 |
| ·植物叶酸代谢工程研究进展 | 第28-29页 |
| ·叶酸研究进展小结 | 第29-30页 |
| ·DHFS、FPGS和DHPS的研究进展小结 | 第30-31页 |
| ·本研究的立题依据、研究目的、意义和技术路线 | 第31-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-51页 |
| ·基因的分离、载体的构建和农杆菌转化 | 第33-39页 |
| ·菌株、载体、引物设计及实验试剂 | 第33-34页 |
| ·E. coli基因及酵母CoXIV线粒体定位序列的分离 | 第34页 |
| ·E. coli染色体DNA的提取 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·E. coli热激感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·酶连体系／质粒转化E. coli | 第36页 |
| ·PCR产物克隆到载体pPCR-Script | 第36页 |
| ·克隆到pFLAP10 | 第36-37页 |
| ·克隆到pBBC10 | 第37-39页 |
| ·pHFolC和pHFolP转化农杆菌AGLo及其检测 | 第39页 |
| ·拟南芥的生长条件及取样 | 第39-40页 |
| ·用于Northern blot分析的样品 | 第39页 |
| ·用于分析叶酸含量的样品 | 第39-40页 |
| ·拟南芥的转化 | 第40-41页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第41-43页 |
| ·种子表面消毒 | 第41页 |
| ·卡那霉素筛选T_1独立转化植株及纯系的筛选 | 第41页 |
| ·T_2代植株卡那霉素抗性比例分析 | 第41页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第41-43页 |
| ·Northern blot分析 | 第43-47页 |
| ·拟南芥总RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·RNA电泳 | 第44-45页 |
| ·RNA转膜 | 第45-46页 |
| ·分子杂交 | 第46-47页 |
| ·Taqman RT-PCR分析 | 第47-48页 |
| ·叶酸含量分析 | 第48-50页 |
| ·叶酸的提取 | 第48页 |
| ·叶酸的酶解 | 第48页 |
| ·指示菌的制备 | 第48-49页 |
| ·叶酸标样的准备 | 第49-50页 |
| ·叶酸含量的测定 | 第50页 |
| ·植株的表型分析 | 第50-51页 |
| 第三章 植物表达载体的构建 | 第51-57页 |
| ·FolC和FolP基因及线粒体定位序列的克隆与鉴定 | 第51-53页 |
| ·双元表达载体pHFolC、pHFolP的构建及农杆菌转化 | 第53-56页 |
| ·载体的构建 | 第53-55页 |
| ·pHFolC和pHFolP转化根癌农杆菌 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第四章 转基因植株的筛选 | 第57-66页 |
| ·转基因独立转化植株的筛选 | 第57-58页 |
| ·FolC独立转化植株的获得 | 第57页 |
| ·FolP独立转化植株的获得 | 第57-58页 |
| ·卡那霉素抗性遗传分析 | 第58-60页 |
| ·转FolC基因植株分析 | 第58页 |
| ·转FolP基因植株分析 | 第58-60页 |
| ·转基因纯系的筛选 | 第60-65页 |
| ·获得4个独立的FolC转基因纯系 | 第60-61页 |
| ·转FolP基因纯系的筛选 | 第61-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第五章 转基因植株FolP基因表达检测及其叶酸含量测定 | 第66-68页 |
| ·FolP转基因植株的Northern blot分析 | 第66页 |
| ·FolP转基因植株叶酸含量的测定 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第六章 拟南芥野生植株内源DHFS／FPGS基因表达分析及叶酸含量测定 | 第68-75页 |
| ·内源DHFS／FPGS基因的表达分析 | 第68-73页 |
| ·不同基因的表达差异分析 | 第68-73页 |
| ·不同组织DHFS及FPGS表达量比较 | 第73页 |
| ·拟南芥野生型植株叶酸含量分析 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-75页 |
| 第七章 FolC转基因植株分析 | 第75-87页 |
| ·FolC转基因植株的Northern blot分析 | 第75页 |
| ·Taqman RT-PCR定量分析 | 第75-81页 |
| ·FolC基因的表达量分析 | 第75-76页 |
| ·FolC转基因植株内源DHFS／FPGS的表达分析 | 第76-81页 |
| ·FolC转基因植株叶酸含量的测定 | 第81-83页 |
| ·幼苗植株的叶酸含量分析 | 第81页 |
| ·植株幼嫩叶片的叶酸含量 | 第81-83页 |
| ·转基因植株的表型分析 | 第83-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第八章 结论与讨论 | 第87-89页 |
| 研究创新点 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-103页 |
| 附录 | 第103-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 作者简历 | 第115页 |
