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对虾白斑综合症病毒(WSSV)囊膜基因vp28、鲤鱼生长激素基因GH的克隆和表达

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-10页
前言第10-27页
 1 生长激素研究进展第10-14页
   ·生长激素及其家族成员第10页
   ·生长激素的分泌和调节第10-11页
   ·鱼类生长激素结构和生物学功能研究进展第11-13页
     ·生长激素的分子结构特点及同源性比较第11-13页
       ·生长激素的分子结构第11-12页
       ·生长激素的同源性比较第12-13页
   ·生长激素作用机理第13页
   ·鱼生长激素在水产养殖中的应用第13-14页
 2 对虾白斑综合症病毒第14-25页
   ·对虾白斑综合症的病原体第14-16页
     ·对虾白斑综合症病毒(WSSV)的命名第14-16页
     ·对虾白斑综合症病毒(WSSV)的分类地位第16页
   ·对虾白斑综合症的症状及病理变化第16-17页
     ·对虾白斑综合症的症状第16页
     ·对虾白斑综合症的病理变化第16-17页
   ·WSSV的大小、形态结构第17-18页
   ·WSSV的感染宿主、传播途径第18页
     ·WSSV的感染宿主的大小、形态结构第18页
     ·WSSV的传播途径第18页
   ·WSSV感染的动物模型第18-19页
   ·WSSV的基因组及其编码的多肽第19-25页
     ·WSSV的基因组及其稳定性第19-20页
     ·WSSV基因组编码的多肽第20-25页
       ·WSSV病毒粒子的主要结构蛋白第20-25页
       ·结构蛋白之间的同源性及其理化特点第25页
 3 本研究的背景、目的和意义第25-27页
材料与方法第27-33页
 1 材料第27-29页
   ·菌种和质粒第27页
   ·常用工具酶及试剂盒第27页
   ·引物第27页
   ·培养基第27页
   ·常用溶液第27-29页
     ·小量碱法制备质粒所用溶液第27-28页
     ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液第28页
     ·丙烯酰胺凝胶电泳所用溶液第28-29页
     ·Western blotting所用溶液第29页
     ·其它溶液的配制第29页
   ·主要仪器第29页
 2 实验方法第29-33页
   ·碱裂解法提取质粒DNA第30页
   ·PCR第30-31页
   ·PCR产物的回收与纯化第31页
   ·连接第31-32页
   ·转化第32页
     ·冷氯化钙法制备感受态细胞第32页
     ·质粒转化大肠杆菌JM109感受态细胞第32页
   ·阳性重组子的检测第32-33页
第一章 囊膜蛋白基因vp28在大肠杆菌中的克隆,表达第33-39页
 0 前言第33页
 1 材料和方法第33-37页
   ·材料第33-34页
   ·方法第34-37页
     ·PCR扩增vp28基因第34页
     ·克隆载体pMD18-T28的构建第34页
     ·重组表达载体的构建第34-35页
     ·外源蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达第35-37页
       ·E.coli BL21(DE3)-pET-vp28的诱导表达第35-36页
       ·基因工程蛋白的粗提取第36页
       ·表达产物的SDS-PAGE鉴定第36页
       ·Western blotting检测第36-37页
 2 结果第37-39页
   ·PCR扩增vp28基因第37页
   ·重组质粒pET-vp28的构建和鉴定第37页
   ·外源蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达第37-38页
   ·表达产物的Western blotting检测第38-39页
 3 讨论第39页
第二章 鲤鱼生长激素在大肠杆菌中的克隆,表达第39-45页
 0 前言第39-40页
 1 材料与方法第40-42页
   ·材料第40页
   ·方法第40-42页
     ·鲤鱼脑垂体总RNA提取第40页
     ·引物设计与合成及RT-PCR第40页
     ·克隆载体的构建第40-41页
     ·DNA序列测序第41页
     ·重组表达质粒的构建第41-42页
     ·外源蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达第42页
       ·E.coli BL2l(DE3)-pET-GH的诱导表达第42页
       ·基因工程蛋白的粗提取第42页
       ·表达产物的SDS-PAGE鉴定第42页
 2 结果第42-44页
   ·总RNA的提取第42-43页
   ·RT-PCR扩增鲤鱼GH cDNA第43页
   ·克隆载体的构建与筛选第43页
   ·DNA序列分析第43页
   ·表达载体的构建和筛选第43页
   ·外源蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达第43-44页
 3 讨论第44-45页
参考文献第45-55页
致谢第55页

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