| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 文献综述 哺乳动物DNA甲基化及其检测方法研究进展 | 第18-61页 |
| 一、概述 | 第18-20页 |
| (一) CpG岛 | 第18页 |
| (二) DNA甲基化的代谢 | 第18-20页 |
| (三) 原核生物DNA甲基化生物学意义 | 第20页 |
| 二、DNA甲基化与胚胎生长发育和组织分化 | 第20-30页 |
| (一) DNA甲基化调控基因表达机制研究 | 第21页 |
| (二) DNA甲基化与基因组印迹 | 第21-24页 |
| (三) DNA甲基化与X染色体失活 | 第24-26页 |
| (四) DNA甲基化与胚胎克隆 | 第26-27页 |
| (五) DNA甲基化与机体免疫力 | 第27-28页 |
| (六) 异常甲基化与肿瘤发生 | 第28-30页 |
| 三、甲基化检测方法 | 第30-40页 |
| (一) 甲基化检测方法的基本原理 | 第30-31页 |
| (二) 甲基化检测方法 | 第31-40页 |
| 1、常规方法 | 第31-35页 |
| 2、特定片段甲基化分析方法 | 第35-39页 |
| 3、多序列甲基化分析方法 | 第39-40页 |
| 四、基因芯片技术及其在DNA甲基化检测中的应用 | 第40-47页 |
| (一) 基因芯片技术工作原理 | 第41-44页 |
| 1、基因芯片的制备 | 第41-43页 |
| 2、样品制备、杂交和检测 | 第43-44页 |
| (二) 基因芯片应用前景 | 第44页 |
| (三) 检测甲基化的基因芯片技术 | 第44-46页 |
| (四) 展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-61页 |
| 第二篇 实验研究 | 第61-117页 |
| 一、分析IGFBP7基因甲基化的寡核苷酸芯片技术研究 | 第61-73页 |
| 1 引言 | 第62-63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-66页 |
| ·标本来源 | 第63页 |
| ·基因组DNA抽提 | 第63页 |
| ·M.Sss Ⅰ酶处理血液基因组DNA和基因组DNA的亚硫酸氢盐修饰 | 第63页 |
| ·PCR扩增与阴性克隆和阳性克隆的制备 | 第63-64页 |
| ·寡聚核苷酸微阵列的制备 | 第64-65页 |
| ·杂交 | 第65页 |
| ·图像扫描与数据处理 | 第65页 |
| ·测序 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-70页 |
| ·MSO检测原理分析 | 第66页 |
| ·定量曲线的绘制 | 第66-69页 |
| ·乳腺组织样本的检测 | 第69-70页 |
| ·测序法验证芯片测定结果的准确性 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 二、DNA甲基化分析的双色荧光杂交微阵列方法研究 | 第73-87页 |
| 1.引言 | 第74-75页 |
| 2.材料与方法 | 第75-77页 |
| ·样本 | 第75页 |
| ·基因组DNA亚硫酸氢盐转化 | 第75页 |
| ·PCR扩增 | 第75-76页 |
| ·对照样本克隆与测序 | 第76页 |
| ·芯片制备 | 第76页 |
| ·探针合成 | 第76页 |
| ·杂交 | 第76页 |
| ·图像扫描与数据处理 | 第76-77页 |
| ·PCR产物测序 | 第77页 |
| 3.结果 | 第77-83页 |
| ·检测原理 | 第77-79页 |
| ·定量分析 | 第79-80页 |
| ·甲基化水平测定标准曲线建立 | 第80-81页 |
| ·样本甲基化水平测定 | 第81页 |
| ·样本测序法验证芯片杂交结果的准确性 | 第81-83页 |
| 4.讨论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 三、亚硫酸氢盐修饰靶DNA芯片甲基化分析方法研究 | 第87-102页 |
| 1 引言 | 第88页 |
| 2.材料与方法 | 第88-91页 |
| ·实验样本 | 第88-89页 |
| ·亚硫酸氢盐修饰与PCR扩增 | 第89-90页 |
| ·PCR产物点样 | 第90页 |
| ·探针1 | 第90页 |
| ·杂交与信号检测 | 第90页 |
| ·亚硫酸氢盐测序 | 第90-91页 |
| ·亚硫酸氢盐基因组DNA阵列制备 | 第91页 |
| ·杂交信号量化与结果统计 | 第91页 |
| 3.结果 | 第91-98页 |
| ·检测原理 | 第91-92页 |
| ·PCR产物阵列分析IGFBP7基因CpG岛甲基化 | 第92-95页 |
| ·PCR产物芯片灵敏度检测 | 第95-97页 |
| ·亚硫酸氢盐转化的基因组芯片检测进行甲基化分析 | 第97-98页 |
| 4.讨论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 四、构建CpG岛文库的抑制性差减杂交技术研究 | 第102-117页 |
| 1 引言 | 第103-104页 |
| 2 材料与方法 | 第104-108页 |
| ·样本基因组DNA的抽提及M.Sss Ⅰ酶处理 | 第104页 |
| ·采用Mse Ⅰ进行gDNA的酶切 | 第104页 |
| ·Driver的制备 | 第104-105页 |
| ·Linker连接 | 第104-105页 |
| ·甲基化敏感性内切酶HapⅡ消化 | 第105页 |
| ·Linker-PCR扩增 | 第105页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第105-107页 |
| ·接头连接及HapⅡ消化 | 第105-106页 |
| ·第一次杂交 | 第106页 |
| ·第二次杂交 | 第106-107页 |
| ·差减产物的PCR扩增 | 第107页 |
| ·差减片段的克隆 | 第107页 |
| ·挑取克隆PCR扩增分析和测序分析 | 第107-108页 |
| ·结果统计分析 | 第108页 |
| 2 结果 | 第108-112页 |
| 3 讨论 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-117页 |
| 创新 | 第117-118页 |
| 攻读博士期间文章发表 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
