| 摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-34页 |
| 1 前言 | 第11页 |
| 2 玉米抗虫基因工程现状 | 第11-24页 |
| ·抗虫基因种类及其应用 | 第12-18页 |
| ·微生物来源的抗虫基因 | 第12-14页 |
| ·植物来源的抗虫基因 | 第14-18页 |
| ·动物来源的抗虫基因 | 第18页 |
| ·受体系统建立 | 第18-20页 |
| ·基因导入方法 | 第20-24页 |
| ·农杆菌法 | 第20-22页 |
| ·基因枪法 | 第22-23页 |
| ·电击法 | 第23页 |
| ·PEG法 | 第23页 |
| ·其它转化方法 | 第23-24页 |
| 3 玉米抗虫基因工程存在的问题及应对策略 | 第24-30页 |
| ·昆虫对转基因植株产生抗性 | 第24-25页 |
| ·外源基因在转基因植株中表达量低 | 第25-28页 |
| ·外源基因失活 | 第28-29页 |
| ·转基因植物的安全性问题 | 第29-30页 |
| 4 目前玉米转基因研究热点 | 第30-33页 |
| ·转抗虫基因 | 第30页 |
| ·抗除草剂玉米 | 第30页 |
| ·抗病玉米 | 第30-31页 |
| ·雄性不育性及其应用 | 第31页 |
| ·作为生物反应器 | 第31页 |
| ·抗逆境胁迫玉米 | 第31-32页 |
| ·后代中去除选择标记的转基因玉米 | 第32-33页 |
| ·共转化 | 第32页 |
| ·位点特异性重组系统 | 第32-33页 |
| 5 研究工作背景及本文立题 | 第33-34页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第34-42页 |
| 1 材料 | 第34-38页 |
| ·供试玉米材料 | 第34页 |
| ·植物表达载体 | 第34页 |
| ·重要试剂配制 | 第34-35页 |
| ·重要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·重要生化试剂 | 第36页 |
| ·培养基配方 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增引物的合成 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-42页 |
| ·受体材料准备 | 第38页 |
| ·工程菌准备 | 第38-39页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·电激转化感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·玉米愈伤组织转化和转化后培养 | 第39页 |
| ·再生植株总DNA提取 | 第39页 |
| ·PCR检测 | 第39-40页 |
| ·PCR-Southern | 第40页 |
| ·Southern blotting | 第40-41页 |
| ·Dot blotting | 第41-42页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第42-54页 |
| 1 转化受体系统的建立 | 第42-43页 |
| ·胚性愈伤组织的诱导 | 第42页 |
| ·基因型对胚性愈伤诱导率的影响 | 第42页 |
| ·甘露醇对胚性愈伤组织诱导效果的影响 | 第42-43页 |
| ·胚性愈伤诱导过程中幼胚褐化的对策 | 第43页 |
| ·2，4-D浓度对胚性愈伤组织生长的影响 | 第43页 |
| 2 农杆菌工程菌制备及愈伤转化 | 第43-48页 |
| ·第一次摇菌时间长短对摇菌效果的影响 | 第44页 |
| ·乙酰丁香酮(As)的加入时间对摇菌效果的影响 | 第44-45页 |
| ·第一次摇菌时利福霉素和卡那霉素加入YEB液体培养基的时间对摇菌效果的影响 | 第45页 |
| ·第一次摇菌后菌液的转接方式对摇菌效果的影响 | 第45-46页 |
| ·18(红)愈伤侵染前预培养和侵染后恢复培养对抗性愈伤出愈率的影响 | 第46-47页 |
| ·愈伤高渗处理对转化效率的影响 | 第47页 |
| ·转接方式对侵染效率的影响 | 第47-48页 |
| 3 转化后愈伤筛选、再生及小苗移栽 | 第48-50页 |
| ·愈伤组织在含不同浓度HygB的培养基上死亡率统计 | 第48-49页 |
| ·愈伤侵染后的筛选方式 | 第49页 |
| ·分化培养基中HygB浓度对绿苗再生的影响 | 第49-50页 |
| ·分化培养基中Kt浓度对分化效果的影响 | 第50页 |
| ·移栽措施对小苗成活率的影响 | 第50页 |
| 4 18(红)转基因阳性植株的获得和分子鉴定 | 第50-54页 |
| ·18(红)阳性植株的获得 | 第50-51页 |
| ·T_0代再生植株PCR检测 | 第51页 |
| ·转Bt基因再生植株PCR-Southern检测 | 第51-52页 |
| ·转SCK基因再生植株Southern blotting检测 | 第52页 |
| ·转Bt和SCK基因再生植株点杂交检测 | 第52-54页 |
| 第四部分 讨论 | 第54-59页 |
| 主要参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录: 质粒图谱、图版及论文发表情况 | 第67-74页 |
