中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
前言 | 第11-12页 |
第一部分 文献综述 | 第12-45页 |
1. 植物基因组学研究 | 第12-32页 |
1.1 植物结构基因组学研究 | 第12-15页 |
1.2 植物功能基因组学研究 | 第15-32页 |
1.2.1 基因产物的表达分析 | 第16-17页 |
1.2.2 插入突变在功能基因研究中的应用 | 第17-32页 |
1.2.2.1 转座子标签技术 | 第18-23页 |
1.2.2.2 T-DNA插入标签技术 | 第23-30页 |
1.2.2.3 基因克隆方法 | 第30-32页 |
1.2.2.4 其他研究方法 | 第32页 |
2. 水稻农杆菌介导的遗传转化 | 第32-41页 |
2.1 外植体类型 | 第33-34页 |
2.2 报告基因、选择标记及启动子 | 第34-36页 |
2.3 水稻转化方法 | 第36-37页 |
2.4 农杆菌介导的水稻遗传转化研究进展 | 第37-41页 |
2.4.1 农杆菌介导转化植物的优点 | 第37-38页 |
2.4.2 农杆菌介导转化单子叶植物的研究 | 第38-39页 |
2.4.3 影响农杆菌转化水稻的重要因素 | 第39-41页 |
3. 分子生物学软件及相关查询网站 | 第41-43页 |
3.1 核酸与蛋白质数据库 | 第41页 |
3.2 数据库的网络服务 | 第41-43页 |
4. 本研究的目的意义和技术路线 | 第43-45页 |
第二部分 水稻T-DNA插入突变群体的构建 | 第45-63页 |
2.1 材料与方法 | 第45-53页 |
2.1.1 材料 | 第45-47页 |
2.1.2 方法 | 第47-53页 |
2.1.2.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
2.1.2.2 组织培养相关培养基 | 第47-49页 |
2.1.2.3 水稻转化 | 第49-50页 |
2.1.2.4 植物总DNA的大量提取 | 第50-51页 |
2.1.2.5 植物总DNA的小量提取 | 第51页 |
2.1.2.6 点杂交 | 第51-52页 |
2.1.2.7 Southern杂交 | 第52-53页 |
2.2 结果与分析 | 第53-60页 |
2.2.1 pSKI015-hpt载体的构建 | 第53-55页 |
2.2.2 中花11号水稻的遗传转化 | 第55-58页 |
2.2.2.1 水稻胚性愈伤转化及转基因株系的获得 | 第56页 |
2.2.2.2 水稻幼穗转化 | 第56-58页 |
2.2.3 转基因植株的分子检测 | 第58-60页 |
2.2.3.1 斑点杂交 | 第58-59页 |
2.2.3.2 Southern杂交 | 第59-60页 |
2.3 讨论 | 第60-63页 |
第三部分 部分T-DNA标签系遗传分析 | 第63-72页 |
3.1 转基因株系的除草剂抗性筛选 | 第63页 |
3.2 水稻T-DNA标签系T_0、T_1代表型鉴定 | 第63-68页 |
3.3 水稻标签系Basta抗性的分离及T-DNA插入位点数的分析 | 第68-69页 |
3.4 讨论 | 第69-72页 |
第四部分 T-DNA插入边界序列测定与分析 | 第72-89页 |
4.1 材料方法 | 第72-75页 |
4.1.1 材料 | 第72页 |
4.1.2 方法 | 第72-75页 |
4.1.2.1 水稻插入边界序列的TAIL-PCR扩增 | 第72-75页 |
4.1.2.2 E.coli CaCl_2感受态细胞的制备 | 第75页 |
4.1.2.3 E.coli感受态细胞的转化 | 第75页 |
4.1.2.4 质粒挽救 | 第75页 |
4.2 结果与分析 | 第75-86页 |
4.2.1 边界序列的TAIL-PCR扩增 | 第75-81页 |
4.2.2 质粒挽救法克隆边界序列 | 第81-86页 |
4.3 讨论 | 第86-89页 |
结论及创新点 | 第89-90页 |
参考文献 | 第90-102页 |
致谢 | 第102页 |