| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-27页 |
| ·转基因动物技术简介 | 第10-16页 |
| ·转基因动物研究历史 | 第10页 |
| ·转基因动物的制作方法 | 第10-14页 |
| ·转基因动物的应用 | 第14-16页 |
| ·转基因克隆动物的现状 | 第16-18页 |
| ·转基因克隆动物存在的问题 | 第17页 |
| ·转基因克隆动物的应用前景 | 第17-18页 |
| ·溶菌酶的研究进展 | 第18-19页 |
| ·外源基因整合位点的分析 | 第19-24页 |
| ·T 接头PCR (T-Linker PCR) | 第19-21页 |
| ·PCR-walking | 第21页 |
| ·双链接头PCR | 第21-22页 |
| ·热不对称交互式PCR (TAIL-PCR) | 第22-23页 |
| ·DW- ACPTM 法 | 第23-24页 |
| ·外源基因拷贝数的分析 | 第24-26页 |
| ·实时荧光定量PCR 法 | 第25页 |
| ·Southrenblot 方法 | 第25页 |
| ·IPCR 方法 | 第25-26页 |
| ·本研究的内容和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-36页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·转基因克隆牛及pBC-hLY 质粒 | 第27页 |
| ·生化药品及试剂 | 第27页 |
| ·缓冲液及主要试剂的配制 | 第27-29页 |
| ·主要仪器和设备 | 第29页 |
| ·DNA 分析软件 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-36页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·外源基因整合位点的克隆与分析 | 第30-34页 |
| ·实时定量 PCR 对外源基因拷贝数的检测 | 第34页 |
| ·PCR 产物纯化、克隆和测序 | 第34-36页 |
| ·5′端整合位点的克隆 | 第36页 |
| ·整合位点纯合性分析 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-45页 |
| ·基因组DNA 的提取和检测结果 | 第36-37页 |
| ·外源基因整合位点鉴定结果 | 第37-42页 |
| ·TAIL-PCR 对0504 个体3′端整合位点的克隆 | 第37-38页 |
| ·DW-ACP PCR 对Yun 个体3′端整合位点的克隆 | 第38页 |
| ·序列测定和结果分析 | 第38-39页 |
| ·通过5′端侧翼序列的克隆验证整合位点 | 第39-41页 |
| ·整合位点纯合性分析结果 | 第41-42页 |
| ·绝对定量 PCR 对外源基因拷贝数的检测结果 | 第42-45页 |
| ·绝对定量标准曲线 | 第42-44页 |
| ·转基因拷贝数的鉴定 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| ·关于整合位点的克隆 | 第45-46页 |
| ·关于外源基因拷贝数的检测 | 第46-47页 |
| ·关于整合位点的纯合性 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 在读期间发表学术论文 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |