| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 第一部分 重组人类免疫缺陷病毒1型整合酶的表达及检测方法的建立 | 第17-40页 |
| 引言 | 第17页 |
| 材料与方法 | 第17-28页 |
| 实验结果 | 第28-39页 |
| 1、粒F185K／C280SIN1-288的转化与验证 | 第28-29页 |
| 2、HIV-1整合酶蛋白的表达与表达条件的研究 | 第29-33页 |
| 3、HIV-1整合酶蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 4、重组HIV-1整合酶活性的确证 | 第34-35页 |
| 5、HIV-1整合酶ELISA检测方法的建立及反应条件的优化 | 第35-37页 |
| 6、ELISA方法重现性稳定性特异性评价 | 第37-38页 |
| 7、ELISA方法特异性评价 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-40页 |
| 第二部分 重组人类免疫缺陷病毒1型蛋白酶的克隆、表达、纯化及ELISA活性检测方法的建立 | 第40-95页 |
| 引言 | 第40-41页 |
| 材料与方法 | 第41-56页 |
| 实验结果 | 第56-93页 |
| 一、HIV-1蛋白酶基因的扩增与表达载体的构建 | 第56-71页 |
| 1.我国HIV-1 B／C重组株CN54蛋白酶基因的PCR扩增和表达载体的构建 | 第56-57页 |
| 2.HIV-1蛋白酶表达载体构建示意图 | 第57-61页 |
| 3.表达载体pMAL-c2-PR,PET-15b-PR,PBV220-PR的验证 | 第61-71页 |
| 1) PCR鉴定阳性克隆 | 第61页 |
| 2) 限制性内切酶酶切鉴定阳性克隆 | 第61-63页 |
| 3) 测序验证 | 第63-71页 |
| 二、HIV-1蛋白酶诱导表达结果 | 第71-85页 |
| 1.PET-15b-PR及PBV220-PR未见外源蛋白的表达 | 第71-73页 |
| 2.pMAL-c2-PR在大肠杆菌系统中的表达 | 第73-85页 |
| ·HIV-1蛋白酶的表达及表达量 | 第73-75页 |
| ·IPTG浓度对HIV-1融合蛋白酶表达的影响 | 第75页 |
| ·HIV-1蛋白酶融合蛋白表达形式的确定 | 第75-77页 |
| ·不同菌株的优化选择 | 第77页 |
| ·生长曲线及诱导最佳时间 | 第77-80页 |
| ·培养基中葡萄糖抑制目的蛋白的表达 | 第80页 |
| ·HIV-1蛋白酶的纯化结果 | 第80-82页 |
| ·纯化后蛋白的定量 | 第82-85页 |
| 三、HIV-1蛋白酶ELISA活性检测方法的建立 | 第85-93页 |
| 1.重组HIV-1蛋白酶的活性的确证及动力学研究 | 第85-86页 |
| 2.HIV-1蛋白酶ELISA检测方法的建立 | 第86-89页 |
| ·反应原理 | 第86页 |
| ·ELISA方法反应条件的优化 | 第86-87页 |
| ·ELISA方法酶反应时间曲线的测定 | 第87页 |
| ·ELISA方法的酶量反应速度曲线 | 第87-88页 |
| ·ELISA方法检测HIV-1蛋白酶活性的重现性稳定性特异性评价 | 第88-89页 |
| 3.ELISA与HPLC方法对比检验ELISA方法用于酶活性及抑制剂研究的可靠性 | 第89-93页 |
| ·ELISA方法与HPLC法测定HIV-1蛋白酶Km值的比较 | 第89-90页 |
| ·比较ELISA方法和HPLC方法检测已知HIV-1蛋白酶抑制剂Saquinavir和Indinavir的符合性 | 第90-93页 |
| 讨论 | 第93-95页 |
| 第三部分 HIV-1逆转录酶、整合酶和蛋白酶多靶点联合筛选与研究抗HIV抑制剂 | 第95-111页 |
| 引言 | 第95页 |
| 材料与方法 | 第95-100页 |
| 实验结果 | 第100-109页 |
| 1.HIV-1RT,IN和PR三种复制酶多靶位抑制剂的筛选和研究 | 第100-106页 |
| ·化合物的筛选 | 第100页 |
| ·植物成分及其衍生物 | 第100-102页 |
| ·中药粗提物 | 第102-106页 |
| 2.NQ-2,3,Abps和CEHL对HIV整合酶的作用机制 | 第106-107页 |
| 3.中药CEH在小鼠体内血清HIV-RT抑制活性动态 | 第107-109页 |
| 讨论 | 第109-111页 |
| 论文结论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-117页 |
| 综述：HIV-1整合酶抑制剂研究进展 | 第117-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
