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小麦叶黄素循环关键酶基因的表达与功能分析

符号说明第1-12页
中文摘要第12-14页
英文摘要第14-17页
1 引言第17-33页
   ·光合作用的光抑制第17-22页
     ·光抑制的原理第17-18页
     ·光抑制、光破坏的防御第18-22页
       ·减少光吸收、增加光能利用能力第18页
       ·状态转换第18-19页
       ·增加热耗散第19-21页
       ·光呼吸第21页
       ·Mehler 反应第21-22页
   ·高等植物体内的叶黄素循环第22-23页
   ·叶黄素循环的主要功能第23-26页
     ·热耗散第24-25页
     ·防止膜脂过氧化第25页
     ·稳定类囊体膜结构第25页
     ·对蓝光的响应第25页
     ·参与ABA 合成途径第25-26页
   ·叶黄素循环能量耗散的分子机理第26-28页
   ·紫黄质脱环氧化酶第28-31页
     ·分子特性第28-29页
     ·紫黄质脱环氧化酶的调节第29-31页
       ·pH 值第29-30页
       ·抗坏血酸(AsA)第30页
       ·DTT第30页
       ·温度第30-31页
       ·UV-B第31页
       ·膜脂第31页
   ·玉米黄质环氧化酶(ZE)第31-32页
   ·研究的目的、意义第32-33页
2 材料与方法第33-52页
   ·试验材料与处理第33-34页
     ·植物材料第33页
     ·材料处理第33页
     ·菌株与质粒第33页
     ·酶及生化试剂第33页
     ·PCR 引物第33-34页
   ·试验方法第34-52页
     ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA第34-35页
     ·RNA 反转录第35-36页
     ·小麦紫黄质脱环氧化酶基因和玉米黄质环氧化酶基因中间片段的克隆第36-37页
     ·电泳目的基因片段的回收第37页
     ·克隆载体的构建第37-40页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第37-38页
       ·连接第38页
       ·转化及克隆筛选第38-39页
       ·碱法小量提取质粒DNA第39-40页
       ·质粒DNA 的酶切鉴定第40页
       ·序列测定第40页
     ·表达载体的构建第40-42页
       ·碱法大量提取质粒DNA第40-42页
       ·载体构建第42页
     ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备及转化第42-44页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第42-43页
       ·冻融法转化农杆菌第43-44页
     ·农杆菌介导转化烟草第44-45页
     ·转基因烟草的PCR 检测第45-46页
       ·CTAB 法提取基因组DNA第45页
       ·转基因植株的PCR 筛选第45-46页
     ·Northern 杂交第46-48页
       ·RNA 提取及电泳第46页
       ·转膜及烘膜第46-47页
       ·探针合成第47页
       ·预杂交、杂交及放射自显影第47-48页
     ·生理指标的测定第48-52页
       ·光合参数的测定第48页
       ·荧光参数的测定第48-49页
       ·过氧化氢(H_2O_2)含量的测定第49页
       ·放氧活性的测定第49页
       ·叶片膜脂成分测定第49-52页
3 结果与分析第52-74页
   ·小麦VDE 与ZE 基因的克隆第52-53页
   ·小麦VDE 和ZE 基因的表达特性分析第53-55页
     ·强光和低温弱光处理不同时间下WVDE 的表达特性第53-54页
     ·强光和低温弱光处理不同时间下WZE 的表达特性第54-55页
   ·WVDE 和WZE 转化烟草第55-60页
     ·反义表达载体的构建第55-56页
     ·表达载体的检测第56-58页
       ·表达载体的PCR 检测第56-57页
       ·表达载体的酶切检测第57-58页
     ·烟草的组培体系第58页
     ·转基因植株的鉴定第58-60页
   ·强光和低温弱光胁迫下转反义 WVDE 基因烟草光合和叶绿素荧光参数的变化第60-64页
     ·转反义WVDE 基因烟草叶片净光合速率的变化第60-61页
     ·转反义WVDE 基因烟草Fv/Fm 的变化第61-62页
     ·转反义WVDE 基因烟草 NPQ 的变化第62页
     ·转反义WVDE 基因烟草叶片过氧化氢含量的变化第62-63页
     ·转反义WVDE 基因烟草放氧速率的变化第63-64页
   ·强光和低温弱光胁迫下转反义 WZE 基因烟草光合和叶绿素荧光参数的变化第64-68页
     ·转反义WZE 基因烟草叶片净光合速率的变化第64-65页
     ·转反义WZE 基因烟草Fv/Fm 的变化第65-66页
     ·转反义WZE 基因烟草 NPQ 的变化第66页
     ·转反义WZE 基因烟草叶片过氧化氢含量的变化第66-67页
     ·转反义WZE 基因烟草放氧速率的变化第67-68页
   ·叶黄素循环在烟草叶片中的表达与叶龄的关系第68-74页
     ·强光胁迫下转WVDE 基因烟草和野生型植株不同叶龄叶片VDE 的表达水平第68-69页
     ·强光胁迫下转基因烟草和野生型烟草幼叶与功能叶光合速率(Pn) 的变化第69-70页
     ·强光胁迫下转基因烟草和野生型烟草YL 与ML Fv第70-71页
     ·强光胁迫下野生型和转基因烟草YL 与ML φPSⅡ的变化第71页
     ·强光胁迫下转基因烟草和野生型烟草YL 与ML NPQ 的变化第71-72页
     ·WT 烟草叶片类囊体膜脂肪酸组成情况第72-74页
4 讨论第74-79页
   ·小麦叶黄素循环关键酶基因的表达特性第74页
   ·转WVDE 反义基因加重烟草的光抑制第74-76页
   ·光保护作用对玉米黄质(Z)的消耗存在速率问题第76-77页
   ·叶黄素循环在烟草叶片当中的表达状况与叶龄有关第77-79页
5 主要结论第79-80页
参考文献第80-88页
致谢第88页

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