| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 0 前言 | 第13-26页 |
| 1 转录因子Twist 的结构特点 | 第13-14页 |
| 2 Twist 的生物学功能 | 第14-18页 |
| ·Twist在胚胎发育中的作用 | 第15页 |
| ·Twist 与细胞周期及凋亡 | 第15-16页 |
| ·Twist 与肿瘤侵袭转移 | 第16-18页 |
| ·EMT 现象与肿瘤转移的关系 | 第16-18页 |
| ·Twist与肿瘤发生发展的关系 | 第18页 |
| 3 Twist 有关的信号传导 | 第18-20页 |
| 4 24p3/NGAL基因特点和蛋白结构特点 | 第20-21页 |
| 5 24p3/NGAL功能的研究现状 | 第21-26页 |
| ·24p3/NGAL 与先天免疫 | 第21-22页 |
| ·24p3/NGAL 与细胞调亡 | 第22-24页 |
| ·24p3/NGAL 与肿瘤发生发展 | 第24-26页 |
| 第一章 Twist 对小鼠乳腺癌细胞基因表达谱的调控研究 | 第26-49页 |
| 第一节 Twist 沉默细胞株的构建及Twist 沉默后对4T1 细胞体内转移能力的影响 | 第27-38页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第27-29页 |
| ·细胞株 | 第27页 |
| ·菌种和载体 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-34页 |
| ·Twist 沉默细胞株的构建 | 第29-32页 |
| ·感受态细胞的制备及质粒的转化 | 第29-30页 |
| ·菌株的保存 | 第30页 |
| ·采用碱裂解法提取质粒 | 第30-31页 |
| ·细胞培养 | 第31页 |
| ·细胞转染和阳性克隆筛选 | 第31-32页 |
| ·细胞的冻存 | 第32页 |
| ·定量PCR 检测Twist mRNA 的表达 | 第32-34页 |
| ·Trizol 法提取细胞总RNA | 第32页 |
| ·反转录获得cDNA | 第32-33页 |
| ·实时定量PCR | 第33-34页 |
| ·小鼠乳腺癌转移实验 | 第34页 |
| ·统计学处理 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-37页 |
| ·Trizol 法提取细胞总RNA | 第34-35页 |
| ·实时定量 PCR 鉴定Twist mRNA 的表达 | 第35-36页 |
| ·Twist 沉默能抑制乳腺癌细胞的肺转移 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第二节 Twist 沉默后小鼠乳腺癌细胞中差异表达基因的分析 | 第38-49页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第38-40页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·芯片材料 | 第39-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-43页 |
| ·基因芯片实验和分析方法 | 第40-42页 |
| ·总RNA 抽提（Trizol 法） | 第40页 |
| ·总RNA 的纯化 | 第40页 |
| ·对样品RNA 进行荧光标记 | 第40-41页 |
| ·杂交与清洗 | 第41页 |
| ·芯片扫描 | 第41页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第41-42页 |
| ·Ratio 分析 | 第42页 |
| ·实时定量PCR 实验 | 第42-43页 |
| ·总RNA 的抽提与反转录获得cDNA | 第42页 |
| ·进行Realtime PCR 反应 | 第42-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-47页 |
| ·基因芯片结果分析 | 第43-46页 |
| ·芯片结果的验证 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第二章 24p3 在乳腺癌转移过程中作用的研究 | 第49-70页 |
| 第一节 24p3 过表达细胞株的构建 | 第50-62页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第50-53页 |
| ·细胞株 | 第50页 |
| ·菌种和载体 | 第50-51页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| 2 实验方法 | 第53-58页 |
| ·24p3 过表达载体的构建 | 第53-56页 |
| ·用PCR 扩增获得小鼠24p3 的cDNA | 第53-54页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第54页 |
| ·采用碱裂解法提取pMSCV-puro 质粒 | 第54页 |
| ·双酶切pMSCV-puro 质粒和PCR 产物 | 第54-55页 |
| ·载体和片段的回收 | 第55页 |
| ·载体和片段的连接 | 第55页 |
| ·感受态的制备与转化 | 第55页 |
| ·酶切鉴定阳性克隆 | 第55-56页 |
| ·阳性克隆的菌株保存及测序 | 第56页 |
| ·24p3 过表达细胞株的构建 | 第56页 |
| ·细胞培养及传代 | 第56页 |
| ·细胞转染和阳性克隆筛选 | 第56页 |
| ·半定量PCR 检测24p3 mRNA 的表达 | 第56-57页 |
| ·Trizol 法提取细胞总RNA 及反转录获得cDNA | 第56页 |
| ·半定量RT-PCR | 第56-57页 |
| ·免疫沉淀及免疫印记实验 | 第57-58页 |
| ·免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP） | 第57-58页 |
| ·免疫印记实验（Western blotting，WB） | 第58页 |
| 3 实验结果 | 第58-61页 |
| ·24p3 过表达载体的构建 | 第58-60页 |
| ·PCR 扩增克隆得到24p3 基因 | 第58-59页 |
| ·过表达载体的酶切鉴定 | 第59-60页 |
| ·24p3 过表达后24p3 mRNA 表达水平的变化 | 第60-61页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第60页 |
| ·24P3 过表达后mRNA 表达水平的变化 | 第60-61页 |
| ·24p3 过表达后蛋白表达水平的变化 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第二节 24p3 的过表达对小鼠乳腺癌发生发展的作用 | 第62-70页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第62-63页 |
| ·细胞株 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| ·实验动物 | 第63页 |
| 2 实验方法 | 第63-65页 |
| ·细胞复苏 | 第63页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖活性 | 第63-64页 |
| ·Transwell 小室法测定细胞迁移能力 | 第64页 |
| ·克隆形成实验 | 第64页 |
| ·体内肿瘤形成和转移实验 | 第64页 |
| ·统计学处理 | 第64-65页 |
| 3 实验结果 | 第65-68页 |
| ·24P3 过表达对4T1 细胞增殖能力的影响 | 第65页 |
| ·24P3 过表达对4T1 细胞克隆形成能力的影响 | 第65-66页 |
| ·24P3 过表达对4T1 细胞体外迁移能力的影响 | 第66-67页 |
| ·24P3 过表达对小鼠乳腺癌细胞肺转移能力的影响 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 总结和展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
