| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-35页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·前列腺癌的小鼠模型 | 第12-21页 |
| ·前列腺癌动物模型种类 | 第12-15页 |
| ·转基因小鼠模型的分类 | 第15-21页 |
| ·与前列腺癌的相关基因研究进展 | 第21-24页 |
| ·癌基因 | 第21-22页 |
| ·抑癌基因 | 第22-24页 |
| ·基因芯片技术 | 第24-29页 |
| ·基因芯片技术原理及步骤 | 第24-26页 |
| ·基因芯片在肿瘤研究中的应用 | 第26-29页 |
| ·生物信息学与新基因功能的预测 | 第29-35页 |
| ·新基因及其功能的预测 | 第29-31页 |
| ·蛋白质结构与功能预测及方法 | 第31-35页 |
| 第二章 小鼠前列腺癌差异表达基因的筛选 | 第35-52页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·试验样品 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·基因芯片 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| ·总RNA 的提取 | 第36页 |
| ·总RNA 的纯化 | 第36-37页 |
| ·基因芯片的操作流程 | 第37页 |
| ·基因芯片结果的分析 | 第37页 |
| ·RT-PCR 实验 | 第37-39页 |
| ·SYBR Green(?) I 实时荧光PCR 检测法 | 第39-41页 |
| ·结果 | 第41-48页 |
| ·总RNA 的制备 | 第41-42页 |
| ·基因芯片的杂交结果 | 第42-43页 |
| ·上调表达基因数量 | 第43页 |
| ·上调差异表达基因分析 | 第43-46页 |
| ·相关候选基因的RT-PCR 检测 | 第46页 |
| ·相关候选基因的实时荧光定量法检测 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·KIMAP 前列腺癌小鼠模型 | 第48-49页 |
| ·利用基因芯片技术进行差异表达基因检测 | 第49页 |
| ·芯片结果的验证 | 第49-50页 |
| ·差异表达基因 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第三章 小鼠TRIM59 基因的克隆及生物信息学分析 | 第52-66页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·载体和菌株 | 第52页 |
| ·组织样品 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要溶液配制 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-57页 |
| ·总RNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·引物设计与合成 | 第54页 |
| ·RT-PCR | 第54-55页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第55页 |
| ·连接 | 第55页 |
| ·转化 | 第55-56页 |
| ·菌落PCR | 第56-57页 |
| ·阳性克隆cDNA 片断测序及序列分析 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-63页 |
| ·组织中总RNA 的提取及检测 | 第57-58页 |
| ·小鼠TRIM59 基因编码区的克隆 | 第58页 |
| ·小鼠TRIM59 基因的生物信息学分析 | 第58-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·小鼠TRIM59 编码区的克隆及物种间相似比对 | 第63页 |
| ·关于TRIM59 基因的功能分析 | 第63-64页 |
| ·生物信息学分析 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第四章 小鼠TRIM59 基因的原核表达 | 第66-77页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·载体及宿主菌 | 第66页 |
| ·cDNA 模板 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-71页 |
| ·引物设计 | 第67页 |
| ·克隆载体的构建 | 第67-68页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第69-70页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第70-71页 |
| ·结果 | 第71-74页 |
| ·pMD18-TRIM59 克隆载体的构建 | 第71页 |
| ·pGEX-2T-TRIM59 原核表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·pGEX-2T-TRIM59 质粒的表达目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第72-73页 |
| ·Western Blotting 检测 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·表达系统的选择与TRIM59 抗原序列的确定 | 第74-75页 |
| ·TRIM59 重组蛋白的表达与纯化 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第五章 TRIM59 兔抗鼠多克隆抗体的制备 | 第77-89页 |
| ·材料 | 第77-78页 |
| ·实验动物 | 第77页 |
| ·抗原蛋白 | 第77页 |
| ·质粒及细胞株 | 第77页 |
| ·主要试剂 | 第77-78页 |
| ·实验仪器 | 第78页 |
| ·方法 | 第78-81页 |
| ·抗原乳化 | 第78页 |
| ·动物接种 | 第78页 |
| ·抗血清的收集 | 第78-79页 |
| ·抗血清的纯化 | 第79页 |
| ·抗体稀释效价的测定（间接法ELISA） | 第79页 |
| ·细胞的复苏 | 第79页 |
| ·细胞传代培养 | 第79-80页 |
| ·细胞转染 | 第80页 |
| ·Western Blotting 检测抗体 | 第80-81页 |
| ·免疫荧光 | 第81页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第81页 |
| ·结果 | 第81-86页 |
| ·多克隆抗体的效价鉴定 | 第81-82页 |
| ·多克隆抗体的Western blotting 检测 | 第82-85页 |
| ·TRIM59 在NIH3T3 细胞中的定位 | 第85页 |
| ·TRIM59 在前列腺癌组织中的表达 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第86-87页 |
| ·多克隆抗体的鉴定 | 第87页 |
| ·TRIM59 定位于NIH3T3 细胞胞浆中 | 第87-88页 |
| ·TRIM59 在前列腺癌组织中的表达 | 第88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| 第六章 TRIM59 的RING 结构域功能研究 | 第89-101页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·质粒和细胞 | 第89页 |
| ·主要试剂 | 第89-90页 |
| ·实验仪器 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-94页 |
| ·引物设计 | 第90页 |
| ·pEBG-TRIM59 点突变载体构建 | 第90-91页 |
| ·细胞的复苏 | 第91页 |
| ·细胞传代培养 | 第91页 |
| ·细胞转染 | 第91-92页 |
| ·真核表达的GST 融合蛋白的纯化 | 第92页 |
| ·细胞总蛋白的定量 | 第92页 |
| ·Western Blot 检测 | 第92-93页 |
| ·GST pull-down 实验 | 第93页 |
| ·体外泛素化修饰实验 | 第93页 |
| ·免疫沉淀实验 | 第93页 |
| ·体内泛素化修饰实验 | 第93-94页 |
| ·结果 | 第94-99页 |
| ·pEBG-TRIM59 点突变载体的构建 | 第94页 |
| ·GST 融合蛋白在细胞293T 中的表达 | 第94-95页 |
| ·TRIM59 蛋白的体外泛素化修饰 | 第95-96页 |
| ·TRIM59 只能和特定的泛素结合酶E2 共同催化泛素化反应 | 第96-97页 |
| ·TRIM59 的RING 结构域具有泛素E3 连接酶活性 | 第97-98页 |
| ·TRIM59 蛋白的体内泛素化修饰 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-100页 |
| ·蛋白质泛素化 | 第99页 |
| ·TRIM59 的泛素连接酶E3 活性 | 第99页 |
| ·RING 结构是TRIM59 具有泛素连接酶E3 活性主要功能区 | 第99-100页 |
| ·TRIM59 的C13A 点突变引入 | 第100页 |
| ·小结 | 第100-101页 |
| 第七章 结论 | 第101-103页 |
| ·主要结论 | 第101-102页 |
| ·本研究的创新点 | 第102页 |
| ·进一步研究内容 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-114页 |
| 缩略词 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 个人简介 | 第116页 |
