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猪瘟病毒Erns蛋白的高效表达及其ELISA诊断试剂盒的建立研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
文献综述第11-27页
 第一章 猪瘟研究进展第11-27页
   ·病毒粒子结构研究进展第12页
   ·CSFV 的理化特性及培养特性研究进展第12-13页
   ·CSFV 的抗原性、毒力和分型研究进展第13-14页
   ·CSFV 的致病机理研究进展第14页
   ·猪瘟病毒的分子生物学研究进展第14-20页
     ·猪瘟病毒的基因组结构第14-15页
     ·编码的结构蛋白及其功能第15-19页
     ·编码的非结构蛋白第19-20页
   ·猪瘟实验室诊断研究进展第20-23页
     ·病毒抗原检测第20页
     ·动物试验第20-21页
     ·血清学诊断方法第21-22页
     ·分子生物学方法第22-23页
   ·猪瘟疫苗研究进展第23-25页
     ·传统疫苗第23-24页
     ·新型疫苗第24-25页
   ·猪瘟防制研究进展第25-27页
试验研究第27-58页
 第二章 猪瘟病毒(CSFV)E~(RNS)蛋白的原核表达第27-48页
   ·实验材料第27-30页
     ·主要试剂第27页
     ·质粒与菌种第27页
     ·实验所用溶液、试剂及其配制第27-30页
     ·主要仪器设备第30页
   ·实验方法第30-40页
     ·CSFV E~(rns) 基因的PCR 扩增第30-32页
     ·E~(rns) 基因T 克隆及鉴定第32-34页
     ·重组表达质粒pET-32a(+)-E~(rns) 的构建第34-36页
     ·目的基因在大肠杆菌中的表达第36-37页
     ·表达产物的SDS-PAGE 分析第37-38页
     ·重组蛋白表达条件的优化第38-39页
     ·重组蛋白的可溶性分析第39页
     ·重组蛋白的Wertern Blot 分析第39-40页
   ·结果和分析第40-46页
     ·目的基因的PCR 扩增第40-41页
     ·E~(rns) 基因的T 克隆第41页
     ·E~(rns) 基因重组原核表达质粒的构建及鉴定第41-42页
     ·表达产物的SDS-PAGE 分析第42页
     ·不同温度对表达量的影响第42-43页
     ·不同时间对蛋白表达量的影响第43-44页
     ·不同IPTG 浓度对蛋白表达量的影响第44-45页
     ·重组蛋白的可溶性分析第45页
     ·表达产物的免疫印迹分析第45-46页
   ·讨论第46-47页
     ·猪瘟病毒E~(rns) 基因的克隆与表达第46页
     ·组氨酸(HIS)融合表达载体第46页
     ·蛋白的表达形式第46页
     ·Western-blotting 分析第46-47页
   ·小结第47-48页
 第三章 E~(rns)蛋白的纯化第48-51页
   ·材料与方法第48-49页
     ·试剂第48页
     ·主要仪第48页
     ·纯化相关溶液的配制第48页
     ·蛋白的大量表达第48页
     ·可溶性蛋白的制备第48-49页
     ·E~(rns) 蛋白浓度、纯度的测定第49页
   ·结果第49页
     ·蛋白的纯度第49页
     ·纯化后蛋白浓度第49页
   ·讨论第49-50页
   ·小结第50-51页
 第四章:重组E~(rns)蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA 方法的研究第51-58页
   ·材料和方法第51-53页
     ·抗原第51页
     ·试剂及其耗材第51页
     ·所用溶液的配制第51-52页
     ·间接ELISA 方法的建立第52页
     ·特异性试验第52页
     ·重复性试验第52-53页
     ·符合性试验第53页
     ·临床样品检测第53页
   ·结果第53-56页
     ·ELISA 最佳工作条件的确定第53-54页
     ·间接 ELISA 方法阴阳性临界值的确定第54页
     ·ELISA 特异性试验第54-55页
     ·重复性试验第55页
     ·敏感性试验第55页
     ·符合性试验第55-56页
     ·临床样品检测第56页
   ·讨论第56-57页
   ·小结第57-58页
结论第58-59页
英文缩略表第59-60页
参考文献第60-66页
致谢第66-67页
个人简介第67页

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