| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-14页 |
| 第一章 研究背景 | 第14-40页 |
| ·哺乳动物中的生殖发育过程 | 第14-24页 |
| ·配子的早期发育 | 第14-15页 |
| ·雌性生殖 | 第15-19页 |
| ·雄性生殖 | 第19-24页 |
| ·Dyneins | 第24-38页 |
| ·Dyneins 的组成、结构及分类 | 第24-28页 |
| ·Dyneins 相关的调控机制 | 第28-33页 |
| ·Dynein 复合体及其组成成分在体内的作用 | 第33-35页 |
| ·Dynein 与原发性纤毛运动障碍综合症(primary ciliary dyskinesia,PCD) | 第35-38页 |
| ·Stat3 | 第38-40页 |
| ·Stat3 的结构 | 第38页 |
| ·Stat3 的功能 | 第38-40页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第40-75页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·DDRT-PCR | 第40-44页 |
| ·总RNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·反转录（RT） | 第41页 |
| ·PCR | 第41-42页 |
| ·凝胶电泳回收目标PCR 产物 | 第42-43页 |
| ·再次PCR、克隆、测序 | 第43-44页 |
| ·5′-RACE 以及3′-RACE | 第44-45页 |
| ·第一条cDNA 链的合成 | 第44页 |
| ·5'/3' -RACE | 第44-45页 |
| ·探针的制备 | 第45-47页 |
| ·总RNA 的提取 | 第45页 |
| ·RT-PCR | 第45-46页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳 | 第46-47页 |
| ·琼脂糖凝胶 DNA 回收(GenClean 琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒) | 第47页 |
| ·Northern blot | 第47-50页 |
| ·RNA 的提取 | 第47页 |
| ·甲醛-琼脂糖凝胶电泳 | 第47-48页 |
| ·转膜（毛细管法） | 第48页 |
| ·膜交联 | 第48-49页 |
| ·标记探针（NEBlot~(?) Phototope~(?) Kit） | 第49页 |
| ·杂交 | 第49-50页 |
| ·显色（NEBlot~(?) Phototope~(?) Star Detection Kit） | 第50页 |
| ·感受态大肠杆菌Top 10 的制备 | 第50-51页 |
| ·载体构建 | 第51-55页 |
| ·Dnaic2 基因过表达载体的构建 | 第51-54页 |
| ·pFB-neo-Dnaic2 重组质粒的构建及病毒载体的收集 | 第54-55页 |
| ·Dnaic2 特异性shRNA 载体的获得 | 第55页 |
| ·脂质体法转染细胞 | 第55-56页 |
| ·Dnaic2 特异性抗体的获得及鉴定 | 第56页 |
| ·抗体 | 第56页 |
| ·抗体特异性的鉴定 | 第56页 |
| ·Western blot | 第56-59页 |
| ·总蛋白的提取 | 第56-57页 |
| ·蛋白浓度的测定（BCA 试剂盒） | 第57页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第57-59页 |
| ·免疫共沉淀 | 第59-60页 |
| ·蛋白的提取 | 第59页 |
| ·抗体准备 | 第59-60页 |
| ·蛋白预处理 | 第60页 |
| ·蛋白共沉淀 | 第60页 |
| ·Western blot 分析 | 第60页 |
| ·组织化学 | 第60-61页 |
| ·石蜡包埋 | 第60-61页 |
| ·普通组织化学 | 第61页 |
| ·免疫荧光组织化学 | 第61-63页 |
| ·组织切片的免疫荧光标记 | 第61-62页 |
| ·精子的免疫荧光标记 | 第62页 |
| ·细胞的免疫荧光双标记 | 第62-63页 |
| ·Dnaic2 过表达小鼠模型的构建 | 第63页 |
| ·PCR 筛选Dnaic2 过表达小鼠 | 第63-65页 |
| ·从小鼠尾中提取基因组DNA | 第63-64页 |
| ·PCR 筛选 | 第64-65页 |
| ·Southern blot | 第65-67页 |
| ·从小鼠尾中提取基因组DNA | 第65页 |
| ·DNA 样品的预处理 | 第65页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳、转膜 | 第65-66页 |
| ·放射性同位素标记探针 | 第66页 |
| ·杂交 | 第66-67页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR（Real-time qRT-PCR） | 第67-68页 |
| ·RT-PCR 检测LC8 的表达 | 第68-69页 |
| ·样本准备 | 第68页 |
| ·RT-PCR | 第68-69页 |
| ·精子计数 | 第69-70页 |
| ·精子悬液的准备 | 第69页 |
| ·精子计数 | 第69-70页 |
| ·精子获能 | 第70页 |
| ·精子鞭毛的透射电镜分析 | 第70-71页 |
| ·细胞生长曲线的测定 | 第71-72页 |
| ·细胞准备 | 第71页 |
| ·脂质体转染细胞 | 第71页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第71-72页 |
| ·BrdU 标记法检测细胞增殖 | 第72-73页 |
| ·脂质体转染细胞 | 第72页 |
| ·BrdU 标记、染色 | 第72-73页 |
| ·Bax/ Bcl-2 比值的测定 | 第73-74页 |
| ·基因序列分析 | 第74页 |
| ·数据分析 | 第74-75页 |
| 第三章 实验结果 | 第75-103页 |
| ·Dnaic2 基因的克隆 | 第75-78页 |
| ·Dnaic2 蛋白在进化过程中具有高度保守性 | 第78-80页 |
| ·Dnaic2 基因特异性表达在成年小鼠的肺、睾丸、卵巢及输卵管中 | 第80页 |
| ·Dnaic2 基因在不同日龄的小鼠卵巢中具有不同的表达 | 第80-82页 |
| ·Dnaic2 蛋白抗血清以及人DNA12 抗体的特异性鉴定 | 第82-83页 |
| ·Dnaic2 蛋白在卵母细胞、输卵管中粘膜上皮细胞、精子及一些早期雄性生殖细胞中有表达.. | 第83-87页 |
| ·Dnaic2 蛋白主要表达在卵母细胞膜附近，且在不同发育阶段的卵泡中具有不同表达 | 第83-85页 |
| ·Dnaic2 蛋白在输卵管中主要表达于粘膜上皮细胞中 | 第85页 |
| ·Dnaic2 蛋白在一些早期雄性生殖细胞及精子中有表达 | 第85-87页 |
| ·Dnaic2 过表达载体的构建与其 shRNAs 的鉴定 | 第87-88页 |
| ·Dnaic2 蛋白可促进NIH 3T3 细胞的增殖 | 第88页 |
| ·Dnaic2 过表达小鼠模型的筛选与鉴定 | 第88-91页 |
| ·Dnaic2 过表达小鼠表型分析 | 第91-95页 |
| ·Dnaic2 蛋白对小鼠肺、卵巢及睾丸等器官中细胞命运的影响 | 第95-97页 |
| ·Dnaic2 与 Stat3 及 LC8 具有相互作用 | 第97-98页 |
| ·Dnaic2 对LC8 表达的影响 | 第98-100页 |
| ·Dnaic2 可促进 Stat3 的磷酸化 | 第100-103页 |
| 第四章 结果讨论 | 第103-109页 |
| ·Dnaic2 可影响纤毛/鞭毛中动力臂的组装从而影响纤毛/鞭毛的运动功能,Dnaic2 表达异常可使小鼠出现与PCD 患者相类似的症状 | 第103-105页 |
| ·小鼠Dnaic2 可影响配子发生 | 第105-106页 |
| ·Dnaic2 在卵子发生过程中具有一定的作用 | 第105-106页 |
| ·Dnaic2 可影响精子发生 | 第106页 |
| ·小鼠Dnaic2 可能通过调节Stat3 以及LC8 影响小鼠肺、卵巢及睾丸等器官中细胞的命运 | 第106-109页 |
| 第五章 全文总结 | 第109-111页 |
| ·主要结论 | 第109页 |
| ·研究展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-129页 |
| 附图ⅠpcDNA3.1-Dnaic2 重组质粒插入片段的测序图谱 | 第129-132页 |
| 附图ⅡpFB-neo-Dnaic2 重组质粒插入片段的测序图谱 | 第132-135页 |
| 附录Ⅰ实验仪器 | 第135-137页 |
| 附录Ⅱ材料与试剂 | 第137-140页 |
| 附录Ⅲ实验试剂的配制方法 | 第140-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第150-151页 |
| 攻读博士学位期间参与的国家项目 | 第151-153页 |
