鼠源抗柑橘溃疡病菌Fab抗体库的构建
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 1 绪论 | 第9-25页 |
| ·柑橘溃疡病菌简介 | 第9-16页 |
| ·柑橘溃疡病的发生与危害 | 第9-11页 |
| ·柑橘溃疡病菌的菌系与分类研究 | 第11-12页 |
| ·柑橘溃疡病菌的基因组及抗病基因研究 | 第12-13页 |
| ·柑橘溃疡病菌的检疫检验技术 | 第13-16页 |
| ·噬菌体抗体库技术简介 | 第16-21页 |
| ·噬菌体抗体库技术的发展历程 | 第16-17页 |
| ·噬菌体抗体库技术的优越性 | 第17-18页 |
| ·噬菌体抗体库的载体 | 第18-20页 |
| ·噬菌体抗体库技术的应用及面临的挑战 | 第20-21页 |
| ·研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究的意义 | 第21-22页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| ·本研究的创新之处 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-36页 |
| ·供试菌株及载体 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第25-27页 |
| ·小鼠脾细胞RNA 的提取 | 第27-29页 |
| ·免疫小鼠 | 第27页 |
| ·小鼠抗血清效价测定 | 第27-28页 |
| ·分离小鼠脾细胞 | 第28页 |
| ·脾细胞总RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·目的片段的扩增与回收 | 第29-31页 |
| ·引物的设计与合成 | 第29页 |
| ·cDNA 第一链的合成与鉴定 | 第29-30页 |
| ·全套轻链和重链Fd 段基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·抗柑橘溃疡病菌噬菌体Fab 抗体库构建 | 第31-36页 |
| ·电转化感受态XLI- Blue 的制备 | 第31页 |
| ·辅助噬菌体原种的制备和滴度测定 | 第31-32页 |
| ·噬粒载体 pComb3x 的制备 | 第32页 |
| ·抗体轻链基因的克隆 | 第32-34页 |
| ·Fab 噬菌体抗体库的构建 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-40页 |
| ·抗血清效价测定 | 第36页 |
| ·总RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·cDNA 第一链合成与鉴定 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增轻链和重链Fd 段基因 | 第38页 |
| ·轻链文库的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·Fab 噬菌体抗体库的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·免疫小鼠 | 第40页 |
| ·RNA 提取 | 第40-41页 |
| ·抗体轻链和重链Fd 段的引物设计及扩增 | 第41页 |
| ·噬菌体抗体文库的构建 | 第41-43页 |
| ·抗体基因PCR 产物的酶切 | 第41页 |
| ·抗体库的多样性 | 第41-42页 |
| ·高效转化效率 | 第42页 |
| ·噬菌体抗体库的保存与扩增 | 第42-43页 |
| 5 结论及后续工作 | 第43-44页 |
| ·主要研究结论 | 第43页 |
| ·后续工作思路 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50页 |
| 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
