| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-21页 |
| ·MRF 家族的发现与重要意义 | 第10页 |
| ·MRF 家族成员 | 第10-13页 |
| ·MyoD 基因 | 第10-11页 |
| ·Myf5 基因 | 第11-12页 |
| ·MyoG 基因 | 第12-13页 |
| ·Myf6 基因研究 | 第13-15页 |
| ·Myf6 基因的分子结构 | 第13页 |
| ·Myf6 基因的功能 | 第13-14页 |
| ·myf6 基因在分化中的作用 | 第14页 |
| ·Myf6 基因的定位 | 第14-15页 |
| ·不同物种中Myf6 基因 | 第15页 |
| ·Myf6 基因应用前景及展望 | 第15-17页 |
| ·在遗传育种方面的应用 | 第15-16页 |
| ·在肌肉的再生方面的应用 | 第16页 |
| ·在疾病治疗方面的应用 | 第16-17页 |
| ·转基因牛的研究 | 第17-19页 |
| ·动物转基因技术主要方法 | 第17-18页 |
| ·转基因牛的研究 | 第18页 |
| ·转基因牛的应用 | 第18-19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第21页 |
| ·主要实验材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·试验方法 | 第22-33页 |
| ·Myf6 基因的克隆与测序 | 第22-26页 |
| ·真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6 的构建 | 第26-28页 |
| ·牛成肌细胞的培养和鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pIRES2-EGFP-myf6 表达载体瞬时转染牛成纤维细胞和成肌细胞 | 第28-29页 |
| ·成纤维细胞和成肌细胞最小致死量测定 | 第29页 |
| ·重组质粒pIRES2-EGFP-myf6 表达载体稳定转染牛成纤维细胞和成肌细胞 | 第29页 |
| ·转染细胞的显微镜检测 | 第29页 |
| ·Western Blot 检测myf6 基因蛋白表达 | 第29-30页 |
| ·Real time PCR 检测相关基因表达 | 第30-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-45页 |
| ·Myf6 基因的PCR 扩增 | 第33页 |
| ·阳性重组子pMD18-M 的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·Myf6 基因的序列测定 | 第34页 |
| ·真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6 的双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·成肌细胞的鉴定 | 第35-36页 |
| ·转染细胞的荧光检测 | 第36-38页 |
| ·转染细胞的荧光检测 | 第36-37页 |
| ·稳定转染后细胞形态观察 | 第37-38页 |
| ·G418 对牛皮肤成纤维细胞最小致死量的确定 | 第38页 |
| ·Western Blot 检测myf6 基因蛋白表达 | 第38-40页 |
| ·Western Blot 检测转染后成纤维细胞中myf6 基因的蛋白表达 | 第38-39页 |
| ·Western Blot 检测转染后成肌细胞中myf6 基因的蛋白表达 | 第39-40页 |
| ·实时荧光RT-PCR 检测相关基因表达 | 第40-45页 |
| ·RT-PCR 检测成纤维细胞相关基因的表达 | 第40-42页 |
| ·RT-PCR 检测转染后成肌细胞相关基因的表达 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45-50页 |
| ·Myf6 基因获得和真核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·Myf6 基因获得 | 第45页 |
| ·真核表达载体构建 | 第45-46页 |
| ·Myf6 基因转染成纤维细胞 | 第46-47页 |
| ·转染方法的选择 | 第46页 |
| ·转染条件的选择 | 第46-47页 |
| ·Myf6 基因对成纤维细胞的影响 | 第47页 |
| ·Myf6 基因转染成肌细胞 | 第47-50页 |
| ·成肌细胞的鉴定 | 第47页 |
| ·G418 筛选稳定转染细胞 | 第47-48页 |
| ·荧光定量PCR 技术 | 第48页 |
| ·Myf6 基因对成肌细胞的影响 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
