| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-25页 |
| 1.1 神经节苷脂 | 第10-15页 |
| 1.1.1 单唾液酸神经节苷脂(GM1)结构与特性 | 第10-13页 |
| 1.1.2 神经节苷脂的药理研究与临床应用 | 第13-14页 |
| 1.1.3 唾液酸的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.2 微生物法制备GM1 | 第15-18页 |
| 1.3 唾液酸酶 | 第18-21页 |
| 1.4 原位分离技术(in situ product removal,简称ISPR) | 第21-23页 |
| 1.5 本课题的研究内容及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 唾液酸酶枯草芽孢杆菌表达体系构建 | 第25-46页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.3 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.3.1 菌株与质粒 | 第26-27页 |
| 2.3.2 实验试剂 | 第27页 |
| 2.3.3 培养基与相关试剂配方 | 第27-29页 |
| 2.4 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.4.1 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第29-33页 |
| 2.4.2 微生物的培养 | 第33页 |
| 2.4.3 枯草芽孢杆菌重组蛋白表达的验证 | 第33-34页 |
| 2.4.4 重组枯草芽孢杆菌产唾液酸酶条件优化 | 第34-35页 |
| 2.4.5 生长细胞体系转化多唾液酸神经节苷脂生产GM1 | 第35页 |
| 2.4.6 薄层层析法(TLC)对神经节苷脂转化的分析 | 第35-36页 |
| 2.4.7 高效液相色谱法对产物(GM1)的分析 | 第36页 |
| 2.5 实验结果 | 第36-44页 |
| 2.5.1 唾液酸酶目的基因的扩增 | 第36-37页 |
| 2.5.2 重组质粒pHT43-sia的构建 | 第37页 |
| 2.5.3 枯草芽孢杆菌重组菌落PCR验证 | 第37-38页 |
| 2.5.4 重组枯草芽孢杆菌生长曲线 | 第38页 |
| 2.5.5 目的蛋白诱导表达结果 | 第38-39页 |
| 2.5.6 重组菌产唾液酸酶条件优化 | 第39-42页 |
| 2.5.7 生长细胞体系转化多唾液酸神经节苷脂生产GM1 | 第42-44页 |
| 2.6 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 重组唾液酸酶酶学性质研究 | 第46-56页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验仪器 | 第46页 |
| 3.3 实验试剂 | 第46-47页 |
| 3.4 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.4.1 唾液酸酶的硫酸铵沉淀 | 第47页 |
| 3.4.2 蛋白含量的测定 | 第47-48页 |
| 3.4.3 温度对唾液酸酶酶活的影响 | 第48页 |
| 3.4.4 pH对唾液酸酶酶活的影响 | 第48页 |
| 3.4.5 金属离子及化学试剂对唾液酸酶酶活的影响 | 第48页 |
| 3.4.6 唾液酸酶的动力学常数 | 第48页 |
| 3.4.7 唾液酸对唾液酸酶的抑制类型和抑制常数的测定 | 第48-49页 |
| 3.5 实验结果 | 第49-54页 |
| 3.5.1 唾液酸酶的硫酸铵分级沉淀 | 第49-50页 |
| 3.5.2 温度对唾液酸酶酶活的影响 | 第50-51页 |
| 3.5.3 pH对唾液酸酶酶活的影响 | 第51-52页 |
| 3.5.4 金属离子与化学试剂对唾液酸酶酶活的影响 | 第52-53页 |
| 3.5.5 唾液酸酶的动力学常数 | 第53页 |
| 3.5.6 唾液酸对唾液酸酶抑制类型和抑制常数的测定 | 第53-54页 |
| 3.6 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 原位分离技术解除唾液酸对唾液酸酶酶活抑制作用 | 第56-63页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验仪器 | 第56-57页 |
| 4.3 实验试剂 | 第57页 |
| 4.4 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.4.1 薄层层析法(TLC)对神经节苷脂转化的分析 | 第57页 |
| 4.4.2 高效液相色谱法(HPLC)测定GM1 | 第57页 |
| 4.4.3 高效液相色谱法(HPLC)测定唾液酸 | 第57-58页 |
| 4.4.4 透析体系解除唾液酸对唾液酸酶的抑制作用 | 第58页 |
| 4.4.5 唾液酸吸附回收中树脂的选择 | 第58-60页 |
| 4.5 实验结果 | 第60-62页 |
| 4.5.1 透析解除唾液酸对唾液酸酶的抑制作用 | 第60-61页 |
| 4.5.2 唾液酸吸附回收树脂的选择 | 第61-62页 |
| 4.5.3 D301树脂对唾液酸的吸附回收 | 第62页 |
| 4.6 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 总结与展望 | 第63-66页 |
| 5.1 总结 | 第63-64页 |
| 5.2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第76页 |
