| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略表 (按字母顺序排列) | 第16-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-31页 |
| 1.1 鲤疱疹病毒Ⅱ型研究进展 | 第19-28页 |
| 1.1.1 流行病学 | 第19-22页 |
| 1.1.2 病原学 | 第22-24页 |
| 1.1.3 诊断与检测方法 | 第24-27页 |
| 1.1.4 防治措施 | 第27-28页 |
| 1.2 病毒感染宿主细胞的分子机制 | 第28-29页 |
| 1.3 酵母双杂交技术及其在水生动物病毒研究中的应用 | 第29-31页 |
| 第二章 不同地区来源CyHV-2分离株部分基因序列比较分析 | 第31-52页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-33页 |
| 2.2.1 病料样品 | 第31-32页 |
| 2.2.2 菌株与质粒 | 第32页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第32页 |
| 2.2.4 主要耗材 | 第32页 |
| 2.2.5 主要实验仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-39页 |
| 2.3.1 PCR引物设计 | 第33页 |
| 2.3.2 病毒DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.3.3 CyHV-2PCR检测 | 第34-35页 |
| 2.3.4 CyHV-2部分基因片段扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.5 目的片段连接T载体及测序 | 第36-39页 |
| 2.4 结果与分析 | 第39-49页 |
| 2.4.1 13株不同地区来源的CyHV-2鉴定 | 第39-40页 |
| 2.4.2 CyHV-2 ORF25基因序列分析 | 第40-41页 |
| 2.4.3 CyHV-2 ORF72基因序列分析 | 第41-42页 |
| 2.4.4 CyHV-2 ORF55部分基因序列分析 | 第42-43页 |
| 2.4.5 CyHV-2 ORF25B部分基因序列分析 | 第43-47页 |
| 2.4.6 CyHV-2 ORF25D部分基因序列分析 | 第47-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25截短蛋白的原核表达及免疫原性分析 | 第52-70页 |
| 3.1 研究目的与意义 | 第52页 |
| 3.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.2.1 实验鱼及饲养条件 | 第52页 |
| 3.2.2 病毒与细胞系 | 第52页 |
| 3.2.3 菌株与质粒 | 第52页 |
| 3.2.4 主要试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.5 主要耗材 | 第53页 |
| 3.2.6 主要实验仪器设备 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-61页 |
| 3.3.1 CyHV-2在GiCB细胞中的增殖 | 第53-54页 |
| 3.3.2 CyHV-2病毒DNA的提取 | 第54页 |
| 3.3.3 CyHV-2 ORF25截短表达基因序列的选择 | 第54页 |
| 3.3.4 PCR引物设计 | 第54页 |
| 3.3.5 PCR扩增目的基因 | 第54-55页 |
| 3.3.6 PCR产物的电泳检测及纯化 | 第55页 |
| 3.3.7 目的片段连接T载体及测序 | 第55-56页 |
| 3.3.8 原核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.9 重组蛋白的诱导表达 | 第57-58页 |
| 3.3.10 重组蛋白的处理 | 第58页 |
| 3.3.11 重组蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 3.3.12 多克隆抗体制备及效价测定 | 第59页 |
| 3.3.13 Westernblot分析 | 第59-60页 |
| 3.3.14 间接免疫荧光检测 | 第60页 |
| 3.3.15 重组蛋白免疫保护率测定 | 第60-61页 |
| 3.3.16 数据分析 | 第61页 |
| 3.4 结果 | 第61-67页 |
| 3.4.1 CyHV-2 ORF25截短表达基因序列的选择 | 第61-62页 |
| 3.4.2 CyHV-2 ORF25基因克隆 | 第62-63页 |
| 3.4.3 CyHV-2 ORF25基因T载体构建 | 第63-64页 |
| 3.4.4 重组表达载体的构建及鉴定 | 第64-65页 |
| 3.4.5 重组蛋白的表达与纯化 | 第65-66页 |
| 3.4.6 重组蛋白多克隆抗体的制备及检测 | 第66页 |
| 3.4.7 间接免疫荧光检测 | 第66-67页 |
| 3.4.8 重组蛋白免疫保护率测定 | 第67页 |
| 3.5 讨论 | 第67-70页 |
| 第四章 鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25在毕赤酵母中的表达及其免疫原性研究 | 第70-93页 |
| 4.1 研究目的与意义 | 第70页 |
| 4.2 实验材料 | 第70-72页 |
| 4.2.1 实验鱼及饲养条件 | 第70页 |
| 4.2.2 病毒与细胞系 | 第70-71页 |
| 4.2.3 菌株与质粒 | 第71页 |
| 4.2.4 主要试剂 | 第71页 |
| 4.2.5 主要耗材 | 第71页 |
| 4.2.6 主要实验仪器设备 | 第71-72页 |
| 4.3 实验方法 | 第72-85页 |
| 4.3.1 CyHV-2 ORF25基因的扩增与纯化 | 第72-73页 |
| 4.3.2 CyHV-2 ORF25基因连接T载体及测序 | 第73-74页 |
| 4.3.3 毕赤酵母表达载体的构建 | 第74-76页 |
| 4.3.4 重组质粒的线性化和回收 | 第76页 |
| 4.3.5 电转酵母菌 | 第76-77页 |
| 4.3.6 转化子的筛选及鉴定 | 第77-78页 |
| 4.3.7 重组酵母的甲醇诱导表达 | 第78-79页 |
| 4.3.8 表达产物的观察与分析 | 第79-81页 |
| 4.3.9 纯化产物的特性研究 | 第81页 |
| 4.3.10 免疫原的制备 | 第81页 |
| 4.3.11 注射免疫 | 第81-82页 |
| 4.3.12 样品采集与处理 | 第82页 |
| 4.3.13 中和抗体效价检测 | 第82页 |
| 4.3.14 免疫相关基因表达变化 | 第82-84页 |
| 4.3.15 攻毒实验 | 第84页 |
| 4.3.16 数据分析 | 第84-85页 |
| 4.4 结果与分析 | 第85-91页 |
| 4.4.1 CyHV-2 ORF25基因克隆与重组质粒构建 | 第85-86页 |
| 4.4.2 表达产物纯化 | 第86页 |
| 4.4.3 SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物 | 第86-87页 |
| 4.4.4 免疫电镜观察结果 | 第87-88页 |
| 4.4.5 病毒滴度抑制实验 | 第88页 |
| 4.4.6 血清中和抗体效价 | 第88-89页 |
| 4.4.7 免疫相关基因的表达变化 | 第89-90页 |
| 4.4.8 相对免疫保护率 | 第90-91页 |
| 4.5 讨论 | 第91-93页 |
| 第五章 鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25编码蛋白宿主细胞受体的初步筛选 | 第93-115页 |
| 5.1 研究目的与意义 | 第93页 |
| 5.2 实验材料 | 第93-94页 |
| 5.2.1 病毒与细胞系 | 第93页 |
| 5.2.2 菌株与质粒 | 第93-94页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第94页 |
| 5.2.4 主要耗材 | 第94页 |
| 5.2.5 主要实验仪器设备 | 第94页 |
| 5.3 实验方法 | 第94-104页 |
| 5.3.1 GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第94-100页 |
| 5.3.2 CyHV-2 ORF25编码蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定 | 第100-103页 |
| 5.3.3 筛选与CyHV-2 ORF25编码蛋白互作的GiCB细胞受体 | 第103-104页 |
| 5.4 结果与分析 | 第104-113页 |
| 5.4.1 GiCB细胞总RNA的提取 | 第104-105页 |
| 5.4.2 文库质量鉴定 | 第105-106页 |
| 5.4.3 CyHV-2-ORF25片段的扩增结果 | 第106-107页 |
| 5.4.4 重组诱饵质粒双酶切及PCR鉴定 | 第107-108页 |
| 5.4.5 酵母菌株阳性克隆的鉴定 | 第108-109页 |
| 5.4.6 重组菌报告基因表达检测结果 | 第109-110页 |
| 5.4.7 筛选与CyHV-2 ORF25编码蛋白互作的细胞受体 | 第110-112页 |
| 5.4.8 初步验证与CyHV-2 ORF25编码蛋白互作的细胞受体 | 第112-113页 |
| 5.5 讨论 | 第113-115页 |
| 第六章 结论 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-124页 |
| 附录 | 第124-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
