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皮考啉酸降解菌株Alcaligenes faecalis JQ135的分离鉴定及分子代谢机制初步研究

摘要第8-10页
ABSTRACT第10-12页
符号与缩略语说明第13-14页
前言第14-15页
第一章 文献综述第15-29页
    1 皮考啉酸简介第15-17页
        1.1 皮考啉酸及其理化性质第15-16页
        1.2 皮考啉酸的来源和用途第16-17页
        1.3 皮考啉酸对环境的污染及生物毒性第17页
    2 微生物降解皮考啉酸的研究进展第17-22页
        2.1 降解皮考啉酸的微生物种类第17-18页
        2.2 皮考啉酸的微生物代谢途径及酶学研究第18-21页
        2.3 微生物降解皮考啉酸的潜在应用第21-22页
    3 粪产碱菌研究简介第22-26页
        3.1 粪产碱菌形态和理化性质第22-23页
        3.2 粪产碱菌的功能研究第23-26页
    4 本论文的研究目的、意义和主要内容第26-29页
        4.1 本论文的研究目的和意义第26-27页
        4.2 研究的主要内容第27-29页
第二章 皮考啉酸降解菌Alcaligenes faecalis JQ135的分离与鉴定第29-41页
    1 材料与方法第29-33页
        1.1 试剂、仪器及培养基第29-30页
            1.1.1 试剂与所用仪器第29-30页
            1.1.2 培养基第30页
        1.2 降解菌株的富集、分离与纯化第30-31页
        1.3 降解菌株的培养特征及生理生化鉴定第31页
        1.4 菌体基因组DNA的提取第31页
        1.5 降解菌株16S rRNA基因的PCR扩增第31-32页
        1.6 16S rRNA基因PCR扩增产物的回收和T/A克隆第32页
        1.7 大肠杆菌感受态细胞的制备与酶连产物的转化第32-33页
        1.8 质粒DNA的小量提取第33页
        1.9 16S rRNA基因序列测定和系统发育地位的确定第33页
    2 结果与分析第33-39页
        2.1 皮考啉酸降解菌株的分离与筛选第33-34页
        2.2 降解菌株JQ135的培养特征及生理生化特性第34-37页
            2.2.1 降解菌株JQ135的菌落形态及培养特征第34-35页
            2.2.2 降解菌株JQ135的Vitek系统鉴定结果第35-37页
            2.2.3 降解菌株JQ135对抗生素的敏感性第37页
        2.3 菌株JQ135的16S rRNA基因序列测定及系统发育地位的确定第37-39页
    3 讨论第39页
    4 本章小结第39-41页
第三章 Alcaligenes faecalis JQ135的降解特性及降解途径研究第41-51页
    1 材料与方法第41-43页
        1.1 菌株、试剂与培养基第41页
        1.2 菌株JQ135活化培养与静息细胞制备第41-42页
        1.3 菌体生长量的测定第42页
        1.4 环境条件对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响第42-43页
            1.4.1 初始pH值对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响第42页
            1.4.2 温度对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响第42-43页
            1.4.3 接菌量对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响第43页
        1.5 皮考啉酸及中间产物的检测第43页
    2 结果与分析第43-50页
        2.1 不同皮考啉酸浓度对菌株JQ135生长和降解的影响第43-45页
        2.2 菌株JQ135的降解特性研究第45-47页
            2.2.1 菌株JQ135降解皮考啉酸的可诱导现象第45页
            2.2.2 初始pH值对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响第45-46页
            2.2.3 温度对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响第46-47页
            2.2.4 接菌量对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响第47页
        2.3 菌株JQ135降解代谢产物鉴定第47-50页
    3 讨论第50页
    4 本章小结第50-51页
第四章 转座子随机突变文库构建与筛选第51-61页
    1 材料与方法第51-55页
        1.1 菌株、试剂与培养基第51-52页
        1.2 菌株活化培养第52页
        1.3 转座子诱变第52-54页
        1.4 皮考啉酸降解失活突变株的筛选第54页
        1.5 皮考啉酸降解失活突变株的验证第54-55页
            1.5.1 转座子抗性基因的PCR验证第54-55页
            1.5.2 突变株降解能力验证第55页
        1.6 突变株降解产物检测第55页
    2 结果与分析第55-59页
        2.1 转座子诱变的最佳条件第55-56页
        2.2 转座子诱变的效率第56-57页
        2.3 转座子突变株的筛选与表型分析第57-59页
    3 讨论第59页
    4 本章小结第59-61页
第五章 突变株Mut-G31的特性分析及突变基因的克隆和功能鉴定第61-75页
    1 材料与方法第61-68页
        1.1 菌株、试剂与培养基第61-62页
        1.2 Mut-G31与野生菌JQ135的特性对比第62-63页
        1.3 Mut-G31转座子插入突变基因的SEFA-PCR克隆第63-65页
            1.3.1 SEFA-PCR引物设计第63页
            1.3.2 扩增体系和流程第63-65页
        1.4 未知序列的测序、组装和分析第65-66页
        1.5 克隆基因的功能回补第66-68页
        1.6 回补菌株的生长和降解特性分析第68页
    2 结果与分析第68-73页
        2.1 突变株Mut-G31与野生株JQ135的特性对比第68-69页
        2.2 Mut-G31突变基因的SEFA-PCR克隆结果第69-70页
        2.3 Mut-G31突变基因的测序、组装和分析第70-71页
        2.4 orf2基因的功能回补第71-73页
    3 讨论第73页
    4 本章小结第73-75页
参考文献第75-83页
全文总结第83-85页
论文主要创新点第85-87页
今后展望第87-89页
附录第89-95页
    附录一 文中所用培养基及试剂配方第89-91页
    附录二 Alcaligenes faecalis JQ135 16S rRNA基因序列(KT988067)第91-92页
    附录三 皮考啉酸降解相关基因序列(KY195989)第92-95页
硕士期间参与发表的论文第95-97页
致谢第97页

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