摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
符号与缩略语说明 | 第13-14页 |
前言 | 第14-15页 |
第一章 文献综述 | 第15-29页 |
1 皮考啉酸简介 | 第15-17页 |
1.1 皮考啉酸及其理化性质 | 第15-16页 |
1.2 皮考啉酸的来源和用途 | 第16-17页 |
1.3 皮考啉酸对环境的污染及生物毒性 | 第17页 |
2 微生物降解皮考啉酸的研究进展 | 第17-22页 |
2.1 降解皮考啉酸的微生物种类 | 第17-18页 |
2.2 皮考啉酸的微生物代谢途径及酶学研究 | 第18-21页 |
2.3 微生物降解皮考啉酸的潜在应用 | 第21-22页 |
3 粪产碱菌研究简介 | 第22-26页 |
3.1 粪产碱菌形态和理化性质 | 第22-23页 |
3.2 粪产碱菌的功能研究 | 第23-26页 |
4 本论文的研究目的、意义和主要内容 | 第26-29页 |
4.1 本论文的研究目的和意义 | 第26-27页 |
4.2 研究的主要内容 | 第27-29页 |
第二章 皮考啉酸降解菌Alcaligenes faecalis JQ135的分离与鉴定 | 第29-41页 |
1 材料与方法 | 第29-33页 |
1.1 试剂、仪器及培养基 | 第29-30页 |
1.1.1 试剂与所用仪器 | 第29-30页 |
1.1.2 培养基 | 第30页 |
1.2 降解菌株的富集、分离与纯化 | 第30-31页 |
1.3 降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第31页 |
1.4 菌体基因组DNA的提取 | 第31页 |
1.5 降解菌株16S rRNA基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
1.6 16S rRNA基因PCR扩增产物的回收和T/A克隆 | 第32页 |
1.7 大肠杆菌感受态细胞的制备与酶连产物的转化 | 第32-33页 |
1.8 质粒DNA的小量提取 | 第33页 |
1.9 16S rRNA基因序列测定和系统发育地位的确定 | 第33页 |
2 结果与分析 | 第33-39页 |
2.1 皮考啉酸降解菌株的分离与筛选 | 第33-34页 |
2.2 降解菌株JQ135的培养特征及生理生化特性 | 第34-37页 |
2.2.1 降解菌株JQ135的菌落形态及培养特征 | 第34-35页 |
2.2.2 降解菌株JQ135的Vitek系统鉴定结果 | 第35-37页 |
2.2.3 降解菌株JQ135对抗生素的敏感性 | 第37页 |
2.3 菌株JQ135的16S rRNA基因序列测定及系统发育地位的确定 | 第37-39页 |
3 讨论 | 第39页 |
4 本章小结 | 第39-41页 |
第三章 Alcaligenes faecalis JQ135的降解特性及降解途径研究 | 第41-51页 |
1 材料与方法 | 第41-43页 |
1.1 菌株、试剂与培养基 | 第41页 |
1.2 菌株JQ135活化培养与静息细胞制备 | 第41-42页 |
1.3 菌体生长量的测定 | 第42页 |
1.4 环境条件对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响 | 第42-43页 |
1.4.1 初始pH值对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响 | 第42页 |
1.4.2 温度对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响 | 第42-43页 |
1.4.3 接菌量对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响 | 第43页 |
1.5 皮考啉酸及中间产物的检测 | 第43页 |
2 结果与分析 | 第43-50页 |
2.1 不同皮考啉酸浓度对菌株JQ135生长和降解的影响 | 第43-45页 |
2.2 菌株JQ135的降解特性研究 | 第45-47页 |
2.2.1 菌株JQ135降解皮考啉酸的可诱导现象 | 第45页 |
2.2.2 初始pH值对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响 | 第45-46页 |
2.2.3 温度对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响 | 第46-47页 |
2.2.4 接菌量对菌株JQ135降解皮考啉酸的影响 | 第47页 |
2.3 菌株JQ135降解代谢产物鉴定 | 第47-50页 |
3 讨论 | 第50页 |
4 本章小结 | 第50-51页 |
第四章 转座子随机突变文库构建与筛选 | 第51-61页 |
1 材料与方法 | 第51-55页 |
1.1 菌株、试剂与培养基 | 第51-52页 |
1.2 菌株活化培养 | 第52页 |
1.3 转座子诱变 | 第52-54页 |
1.4 皮考啉酸降解失活突变株的筛选 | 第54页 |
1.5 皮考啉酸降解失活突变株的验证 | 第54-55页 |
1.5.1 转座子抗性基因的PCR验证 | 第54-55页 |
1.5.2 突变株降解能力验证 | 第55页 |
1.6 突变株降解产物检测 | 第55页 |
2 结果与分析 | 第55-59页 |
2.1 转座子诱变的最佳条件 | 第55-56页 |
2.2 转座子诱变的效率 | 第56-57页 |
2.3 转座子突变株的筛选与表型分析 | 第57-59页 |
3 讨论 | 第59页 |
4 本章小结 | 第59-61页 |
第五章 突变株Mut-G31的特性分析及突变基因的克隆和功能鉴定 | 第61-75页 |
1 材料与方法 | 第61-68页 |
1.1 菌株、试剂与培养基 | 第61-62页 |
1.2 Mut-G31与野生菌JQ135的特性对比 | 第62-63页 |
1.3 Mut-G31转座子插入突变基因的SEFA-PCR克隆 | 第63-65页 |
1.3.1 SEFA-PCR引物设计 | 第63页 |
1.3.2 扩增体系和流程 | 第63-65页 |
1.4 未知序列的测序、组装和分析 | 第65-66页 |
1.5 克隆基因的功能回补 | 第66-68页 |
1.6 回补菌株的生长和降解特性分析 | 第68页 |
2 结果与分析 | 第68-73页 |
2.1 突变株Mut-G31与野生株JQ135的特性对比 | 第68-69页 |
2.2 Mut-G31突变基因的SEFA-PCR克隆结果 | 第69-70页 |
2.3 Mut-G31突变基因的测序、组装和分析 | 第70-71页 |
2.4 orf2基因的功能回补 | 第71-73页 |
3 讨论 | 第73页 |
4 本章小结 | 第73-75页 |
参考文献 | 第75-83页 |
全文总结 | 第83-85页 |
论文主要创新点 | 第85-87页 |
今后展望 | 第87-89页 |
附录 | 第89-95页 |
附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第89-91页 |
附录二 Alcaligenes faecalis JQ135 16S rRNA基因序列(KT988067) | 第91-92页 |
附录三 皮考啉酸降解相关基因序列(KY195989) | 第92-95页 |
硕士期间参与发表的论文 | 第95-97页 |
致谢 | 第97页 |