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类胆碱转运体CTL1调控拟南芥生长发育的机理研究

摘要第9-11页
ABSTRACT第11-12页
缩略词表第13-14页
第一章 绪论第14-42页
    1.1 植物内膜分拣系统第14-29页
        1.1.1 参与膜泡运输的细胞器第14-18页
        1.1.2 参与植物膜泡运输的蛋白质第18-28页
            1.1.2.1 膜泡运输中的拴系因子第19-21页
            1.1.2.2 植物中的一类小G蛋白—Rab蛋白第21-22页
            1.1.2.3 植物SNAREs蛋白第22-23页
            1.1.2.4 网格蛋白复合体(clathrin)介导的内吞过程第23-24页
            1.1.2.5 ESCRT介导“货物”进入MVB中的ILVs第24-26页
            1.1.2.6 泛素化在内吞过程中扮演着重要角色第26-27页
            1.1.2.7 内体中的质子泵和离子转运体第27-28页
        1.1.3 内体分拣所参与的生理活动第28-29页
    1.2 植物生长素研究进展第29-40页
        1.2.1 生长素的合成第29-31页
        1.2.2 生长素的信号转导过程第31-32页
        1.2.3 生长素在植物体内的极性转运第32-38页
            1.2.3.1 生长素输出转运体PIN-FORMED(PIN)蛋白家族第33-35页
            1.2.3.2 PIN-LIKES (PILS)生长素转运体家族第35-36页
            1.2.3.3 生长素输入转运体AUX/LAX蛋白家族第36-37页
            1.2.3.4 MDR/PGP生长素转运体第37-38页
            1.2.3.5 拟南芥中WAT1和NRT1.1蛋白具有转运生长素的功能第38页
        1.2.4 膜泡运输途径对生长素转运体的调控第38-40页
    1.3 本研究关注的科学问题第40-42页
第二章 材料与方法第42-54页
    2.1 实验材料第42-44页
        2.1.1 植物材料第42-43页
        2.1.2 实验过程中使用到的菌株第43页
        2.1.3 实验过程中使用到的载体第43页
        2.1.4 实验过程中使用到的试剂第43-44页
    2.2 实验方法第44-54页
        2.2.1 拟南芥种子消毒和生长条件第44页
        2.2.2 拟南芥DNA的提取以及突变体鉴定第44-45页
        2.2.3 载体构建第45-46页
        2.2.4 拟南芥的转化第46-47页
        2.2.5 RNA的提取和real-time PCR第47-48页
        2.2.6 酵母双杂交(Y2H)实验(筛库与点对点验证)第48-50页
        2.2.7 拟南芥悬浮细胞PSB-D原生质体制备和转化第50-51页
        2.2.8 拟南芥根、子叶下胚轴和顶端弯钩表型观察与测量第51页
        2.2.9 GUS染色第51页
        2.2.10 拟南芥杂交实验第51-52页
        2.2.11 荧光观察实验第52页
        2.2.12 荧光漂白恢复实验第52-53页
        2.2.13 药物处理实验第53-54页
第三章 实验结果第54-92页
    3.1 CTL1影响细胞的伸长第54-58页
        3.1.1 突变体的鉴定及回补第54-55页
        3.1.2 CTL1的突变导致植株短小第55-58页
    3.2 CTL1主要定位在质膜(PM)、反式高尔基网状结构(TGN)和液泡前体(PVC)中第58-64页
    3.3 CTL1的组织定位研究第64-67页
    3.4 ctl1突变体表现出一系列生长素相关的表型第67-73页
        3.4.1 ctl1突变体的顶端弯钩发育存在缺陷第68-71页
        3.4.2 CTL1敲除掉后影响拟南芥子叶下胚轴的向光性第71-72页
        3.4.3 ctl1突变体对高浓度的NAA不敏感第72-73页
    3.5 CTL1影响植物对生长素信号的响应第73-76页
    3.6 ctl1突变体中生长素转运体PIN1和PIN3在质膜上的丰度降低第76-79页
    3.7 CTL1对PIN1和PIN3的调节发生在转录后第79-80页
    3.8 CTL1影响PIN1和PIN3的胞吐到质膜第80-83页
    3.9 CTL1所参与的调控体系初探第83-88页
        3.9.1 膜泡运输调控是顶端弯钩发育过程中必需的一个环节第83-84页
        3.9.2 CTL1在胞内的分拣过程依赖于GNOM第84-85页
        3.9.3 Endosidin2(ES2)能够抑制CTL1在胞内的循环效率第85-86页
        3.9.4 CTL1对内膜系统发育的影响第86-88页
    3.10 Y2H筛选与CTL1相互作用蛋白第88-90页
    3.11 研究路线总结第90-92页
第四章 结论与展望第92-97页
    4.1 本研究的主要结论第92-94页
        4.1.1 CTL1影响了生长素相关的生长发育过程第92页
        4.1.2 CTL1调控了生长素转运体PIN1和PIN3往质膜上分拣第92-93页
        4.1.3 CTLl进一步的作用机制解析第93-94页
    4.2 展望第94-97页
        4.2.1 CTL1对其它质膜蛋白的调控第94页
        4.2.2 建立CTL1的分子调控网络第94-95页
        4.2.3 CTL1是否特异性地转运胆碱第95-97页
参考文献第97-116页
附录第116-123页
    附表1 酵母,哺乳动物和拟南芥中的ESCRT和ESCRT相关蛋白第116-118页
    附表2 拟南芥中的栓系复合体第118-120页
    附表3 拟南芥中的SNARE蛋白第120-122页
    附表4 本研究过程中使用到的引物第122-123页
致谢第123-125页
在学期间已(待)发表的论文第125-126页

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