| 中文摘要 | 第1-22页 |
| ABSTRACT | 第22-32页 |
| 符号说明 | 第32-34页 |
| 第一部分 文献综述 | 第34-73页 |
| 一.HBV与免疫耐受 | 第34-44页 |
| 1. HBV的特征 | 第34-38页 |
| ·HBV感染现状 | 第34页 |
| ·HBV基因组 | 第34-36页 |
| ·HBV的生活周期和复制 | 第36-38页 |
| 2. HBV诱导免疫耐受 | 第38-41页 |
| ·肝脏在抗病毒天然免疫中的地位 | 第38-39页 |
| ·HBV诱导免疫耐受机制 | 第39-41页 |
| 3. HBV的治疗 | 第41-43页 |
| ·IFN-α | 第41-42页 |
| ·核苷类似物 | 第42页 |
| ·RNAi类分子 | 第42-43页 |
| 4. 总结与展望 | 第43-44页 |
| 二、RNAI干扰技术:从基础科学到临床研究 | 第44-55页 |
| 1. RNAI及基因沉默原理 | 第44-46页 |
| ·RNAi的发现 | 第44页 |
| ·siRNA的沉默机制 | 第44-45页 |
| ·siRNA与miRNA | 第45-46页 |
| 2. RNAI技术的应用 | 第46-48页 |
| ·高通量研究基因功能 | 第46页 |
| ·研究信号转导通路的新工具 | 第46-47页 |
| ·siRNA与药物研发 | 第47-48页 |
| 3. RNAI的非靶效应 | 第48-50页 |
| ·siRNA非特异性基因沉默作用 | 第49页 |
| ·siRNA的非靶毒副作用 | 第49-50页 |
| 4. RNAI的免疫激活效应 | 第50-53页 |
| ·TLR受体 | 第50-52页 |
| ·非TLR受体 | 第52-53页 |
| 5. 总结与展望 | 第53-55页 |
| 三.SIRNA的免疫激活作用与疾病治疗 | 第55-63页 |
| 1. 控制免疫激活作用 | 第55-59页 |
| ·选择合适的siRNA序列 | 第55-56页 |
| ·siRNA化学修饰 | 第56页 |
| ·siRNA脂质载体研究 | 第56-57页 |
| ·高分子材料和其他siRNA载体 | 第57页 |
| ·病毒载体 | 第57-58页 |
| ·适配体修饰siRNA | 第58-59页 |
| 2. 利用SIRNA免疫激活作用 | 第59-62页 |
| ·RNA类佐剂的研究 | 第59-60页 |
| ·抗肿瘤研究 | 第60页 |
| ·抗血管生成 | 第60-61页 |
| ·抗病毒作用 | 第61页 |
| ·对获得性免疫的激活作用 | 第61-62页 |
| 3. 总结与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 第二部分 3P-HBX-SIRNA激活胞内天然免疫受体RIG-Ⅰ并逆转HBV免疫耐受 | 第73-117页 |
| 前言 | 第73-76页 |
| 材料方法 | 第76-94页 |
| 结果 | 第94-111页 |
| 1. 5'-TRIPHOSPHATE-SIRNA的体外转录以及鉴定 | 第94-95页 |
| 2. 3P-SIRNA的序列非依赖性免疫激活效应 | 第95-97页 |
| ·3p-siRNA的序列非依赖性引起免疫激活效应 | 第95页 |
| ·3p-siRNA的序列非依赖性抑制HBV的复制 | 第95-97页 |
| 3. 化学合成SIRNA的抗HBV和免疫激活效应 | 第97-98页 |
| ·化学合成siRNA的抗HBV效应 | 第97页 |
| ·化学合成siRNA的免疫激活效应 | 第97-98页 |
| 4. 3P-HBX-SIRNA的"OFF-TARGET"免疫刺激效应 | 第98-101页 |
| ·3p-HBx-siRNA对胞内信号通路的活化 | 第99页 |
| ·3p-HBx-siRNA的干扰素效应 | 第99-100页 |
| ·3p-HBx-siRNA的炎症效应 | 第100-101页 |
| 5. 双功能3P-HBX-SIRNA优于单纯基因沉默HBX-SIRNA | 第101-103页 |
| ·双功能3p-HBx-siRNA优于单纯基因沉默HBx-siRNA(mRNA水平) | 第101-102页 |
| ·双功能3p-HBx-siRNA优于单纯基因沉默HBx-siRNA(蛋白水平) | 第102-103页 |
| 6. 3P-HBX-SIRNA逆转HBV免疫耐受 | 第103-107页 |
| ·HBV导致HepG2.2.15处于免疫耐受状态 | 第104-105页 |
| ·HepG2细胞对3p-siRNA的应答更为敏感 | 第105-106页 |
| ·双功能3p-HBx-siRNA逆转HBV免疫耐受 | 第106-107页 |
| 7. 3P-HBX-SIRNA的免疫刺激效应与RIG-Ⅰ介导Ⅰ型干扰素有关 | 第107-111页 |
| ·过表达RIG-Ⅰ逆转HBV的免疫抑制效应 | 第107-108页 |
| ·沉默RIG-Ⅰ加重HBV的免疫抑制效应 | 第108-109页 |
| ·阻断干扰素受体加重HBV的免疫抑制效应 | 第109-111页 |
| 讨论与总结 | 第111-114页 |
| 参考文献 | 第114-117页 |
| 第三部分 化学合成的HBX-SIRNA能够通过激活PKR信号通路进一步抑制HBV的复制 | 第117-139页 |
| 前言 | 第117-119页 |
| 材料方法 | 第119-124页 |
| 结果 | 第124-134页 |
| 1. HBX-SIRNAS抑制HBV的表达 | 第124-126页 |
| ·HBx-siRNAs的沉默效果(mRNA水平) | 第124页 |
| ·HBx-siRNAs抑制HBV的表达(蛋白水平) | 第124页 |
| ·HBx-siRNAs对HBV的抑制效果具有浓度依赖性 | 第124-126页 |
| 2. HBX-SIRNAS诱导免疫应答反应 | 第126-128页 |
| ·HBx-siRNAs的干扰素效应 | 第126页 |
| ·HBx-siRNAs的炎症效应 | 第126-127页 |
| ·HBx-siRNAs对趋化因子影响较弱 | 第127-128页 |
| 3. HBX-SIRNAS能够诱导PKR以及下游信号通路的活化 | 第128-129页 |
| ·HBx-siRNAs促进PKR的表达 | 第128页 |
| ·HBx-siRNAs活化PKR信号通路 | 第128-129页 |
| 4. PKR介导HBX-SIRNAS诱导的免疫应答 | 第129-131页 |
| ·抑制PKR,HBx-siRNAs诱导的免疫应答减弱 | 第129-131页 |
| ·过表达PKR,促进HBx-siRNAs诱导的免疫应答 | 第131页 |
| 5. PKR活化对于HBV的影响 | 第131-134页 |
| ·抑制PKR,HBx-siRNAs诱导的抗病毒效应减弱 | 第131-132页 |
| ·过表达PKR,HBx-siRNAs诱导的抗病毒效应增强 | 第132-134页 |
| 讨论与总结 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-139页 |
| 第四部分 SIRNA体内逆转HBV免疫耐受 | 第139-169页 |
| 前言 | 第139-141页 |
| 材料方法 | 第141-151页 |
| 结果 | 第151-163页 |
| 1. HBV持留续存(免疫耐受)小鼠模型的建立 | 第151-152页 |
| ·HBV表达质粒的提取以及鉴定 | 第151页 |
| ·HBV持留续存(免疫耐受)小鼠模型的建立及阳性小鼠筛选 | 第151-152页 |
| 2. 3P-HBX-SIRNA对HBV免疫耐受小鼠肝实质细胞的双功能抗病毒效应 | 第152-154页 |
| ·HBV免疫耐受鼠肝实质细胞的提取分离 | 第152页 |
| ·HBx-siRNA和3p-HBx-siRNA的抗病毒效应 | 第152-153页 |
| ·HBx-siRNA和3p-HBx-siRNA的免疫刺激效应 | 第153-154页 |
| 3. HBX-SIRNA和3P-HBX-SIRNA的体内抗病毒效应 | 第154-156页 |
| 4. SIRNA在HBV免疫耐受小鼠体内的免疫激活效应 | 第156-162页 |
| ·HBx-siRNA和3p-HBx-siRNA对血清细胞因子水平的影响 | 第156-157页 |
| ·HBx-siRNA和3p-HBx-siRNA对肝脾淋巴细胞比例和数量的影响 | 第157-158页 |
| ·HBx-siRNA和3p-HBx-siRNA对肝脏淋巴细胞活化的影响 | 第158-160页 |
| ·HBx-siRNA或3p-HBx-siRNA对肝脏淋巴细胞NKG2D表达的影响 | 第160-162页 |
| 5. 肝损伤的检测 | 第162-163页 |
| 讨论与总结 | 第163-167页 |
| 参考文献 | 第167-169页 |
| 总结 | 第169-170页 |
| 文章创新点及意义 | 第170-171页 |
| 致谢 | 第171-172页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第172-173页 |
| 攻读学位期间参加的学术会议 | 第173-174页 |
| 攻读学位期间获奖情况 | 第174页 |
| 攻读学位期间发明专利 | 第174-175页 |
| 待发表SCI论文1 | 第175-205页 |
| 待发表SCI论文2 | 第205-222页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第222页 |
