| 摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩写词表 | 第14-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-26页 |
| 1.1 IDH1 R132H与胶质瘤的发生、发展 | 第16-18页 |
| 1.2 IDH1 R132H为靶向药物的开发提供了新靶点 | 第18-19页 |
| 1.3 针对小肽单克隆抗体的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.4 联合免疫的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.5 本课题研究意义 | 第23页 |
| 1.6 本课题技术路线 | 第23-26页 |
| 第2章 IDH1 R132H小肽腺病毒疫苗的构建及其活性检测 | 第26-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 细胞、菌株及质粒载体 | 第27页 |
| 2.1.2 材料及试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂的配制 | 第27-29页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.1.5 引物 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 携带IDH1 R132H小肽腺病毒E1区穿梭载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.2 一步法构建Hexon HVR5经IDH1 R132H小肽修饰的腺病毒载体 | 第32-33页 |
| 2.2.3 既表达又修饰的新型腺病毒载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.4 细胞操作 | 第35-36页 |
| 2.2.5 报告基因荧光素酶体内外活力检测 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-42页 |
| 2.3.1 腺病毒质粒载体的鉴定 | 第37-40页 |
| 2.3.2 腺病毒包装及滴度测定 | 第40-41页 |
| 2.3.3 IDH1 R132H小肽腺病毒疫苗Luciferase活力测定 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第3章 IDH1 R132H相关蛋白表达载体的构建及表达纯化 | 第44-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 3.1.1 菌株及质粒载体 | 第45页 |
| 3.1.2 材料及试剂 | 第45页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第45-46页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第46页 |
| 3.1.5 引物 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.2.1 HBcAg-IDH1 R132H原核表达载体的构建 | 第47页 |
| 3.2.2 HBcAg-IDH1 R132H融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.3 Grn E-IDH1 R132H原核表达载体的构建 | 第48页 |
| 3.2.4 Grn E-IDH1 R132H融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.5 Western blot检测IDH1 R132H小肽融合蛋白 | 第49页 |
| 3.2.6 Grn E-IDH1 R132 mutants原核表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.7 Grn E-IDH1 R132 mutants融合蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| 3.2.8 人IDH1 R132H真核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.3 实验结果 | 第51-56页 |
| 3.3.1 pET-28a/HBcAg-IDH1 R132H表达载体的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.2 HBcAg-IDH1 R132H融合蛋白的表达和纯化 | 第52页 |
| 3.3.3 pRSET-B/Grn E-IDH1 R132H表达载体的构建及鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.4 Grn E-IDH1 R132H融合蛋白的表达和纯化 | 第53页 |
| 3.3.5 IDH1 R132H小肽融合蛋白的Western blot结果 | 第53-54页 |
| 3.3.6 pRSET-B/Grn E-IDH1 R132 mutants表达载体的构建及鉴定 | 第54页 |
| 3.3.7 Grn E-IDH1 R132 mutants融合蛋白的表达 | 第54-55页 |
| 3.3.8 人IDH1 R132H真核表达载体的鉴定和表达 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第4章 针对IDH1 R132H单克隆抗体的制备鉴定与应用 | 第58-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 菌株及质粒载体 | 第59页 |
| 4.1.2 材料及试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第59-60页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-65页 |
| 4.2.1 免疫动物 | 第60-62页 |
| 4.2.2 骨髓瘤细胞SP2/0和饲养细胞的准备 | 第62页 |
| 4.2.3 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第62-63页 |
| 4.2.4 单克隆抗体腹水的制备 | 第63页 |
| 4.2.5 单克隆抗体的鉴定 | 第63-64页 |
| 4.2.6 单克隆抗体的重链亚型测定和纯化 | 第64页 |
| 4.2.7 单克隆抗体的应用研究 | 第64-65页 |
| 4.3 实验结果 | 第65-73页 |
| 4.3.1 IDH1 R132H单克隆抗体的制备 | 第65-67页 |
| 4.3.2 IDH1 R132H单克隆抗体特异性的鉴定 | 第67-70页 |
| 4.3.3 IDH1 R132H单克隆抗体亚型测定和纯化 | 第70-71页 |
| 4.3.4 IDH1 R132H免疫组化染色 | 第71-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73-76页 |
| 第5章 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 附录 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第94页 |
