| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 绪论 | 第17-30页 |
| 1.1 胰腺发育的调控 | 第17-20页 |
| 1.1.1 胰腺结构和功能 | 第17页 |
| 1.1.2 胰腺发育过程 | 第17-20页 |
| 1.2 microRNAs与胰腺发育和功能 | 第20-23页 |
| 1.2.1 miRNAs与胰腺细胞分化和增殖 | 第20-21页 |
| 1.2.2 miRNAs与胰岛素合成和分泌 | 第21-23页 |
| 1.2.3 miRNAs与胰腺外分泌功能 | 第23页 |
| 1.3 miR-17-92基因簇miRNAs研究进展 | 第23-29页 |
| 1.3.1 miR-17-92基因簇miRNAs成员 | 第23-25页 |
| 1.3.2 miR-17-92基因簇miRNAs对哺乳动物器官发育和肿瘤发生的调控 | 第25-26页 |
| 1.3.3 miR-17-92基因簇的转录调控和主要靶基因 | 第26-28页 |
| 1.3.4 miR-17-92基因簇miRNAs成员之间的协同与拮抗作用 | 第28-29页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 2 miR-17-92基因簇miRNAs对胰腺祖细胞的调控 | 第30-56页 |
| 2.1 试验材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 试验动物和细胞系 | 第30页 |
| 2.1.2 载体、miRNAs和siRNAs | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 2.2 试验方法 | 第32-41页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第32-33页 |
| 2.2.2 胰腺祖细胞转染 | 第33页 |
| 2.2.3 胰腺祖细胞诱导分化 | 第33页 |
| 2.2.4 胚胎胰腺剥离 | 第33页 |
| 2.2.5 胰芽培养和转染 | 第33-34页 |
| 2.2.6 细胞计数 | 第34页 |
| 2.2.7 CCK8 | 第34页 |
| 2.2.8 EdU检测细胞增殖 | 第34页 |
| 2.2.9 流式细胞术检测细胞周期 | 第34-35页 |
| 2.2.10 细胞凋亡检测 | 第35页 |
| 2.2.11 总RNA提取和反转录 | 第35-38页 |
| 2.2.12 实时定量PCR | 第38-39页 |
| 2.2.13 Western Blot | 第39-40页 |
| 2.2.14 组织切片免疫荧光染色 | 第40-41页 |
| 2.2.15 靶基因预测 | 第41页 |
| 2.2.16 载体构建 | 第41页 |
| 2.2.17 双荧光素酶报告系统检测 | 第41页 |
| 2.2.18 统计分析 | 第41页 |
| 2.3 实验结果 | 第41-52页 |
| 2.3.1 miR-17-92基因簇在成体胰腺细胞的差异表达 | 第41-42页 |
| 2.3.2 miR-17-92基因簇miRNAs对胰腺祖细胞增殖的影响 | 第42-43页 |
| 2.3.3 miR-18a抑制胰腺祖细胞增殖的机制 | 第43-50页 |
| 2.3.4 miR-17-92基因簇miRNAs对胰腺祖细胞增殖的拮抗作用 | 第50-51页 |
| 2.3.5 诱导胰腺祖细胞分化后miR-17-92基因簇miRNAs表达变化 | 第51页 |
| 2.3.6 miR-17-92基因簇miRNAs对胰腺祖细胞分化过程中基因表达的影响 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-55页 |
| 2.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 3 miR-17-92基因簇miRNAs对腺泡细胞的调控 | 第56-74页 |
| 3.1 试验材料 | 第56-57页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第56页 |
| 3.1.2 裁体和miRNAs | 第56页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第56-57页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第57页 |
| 3.2 试验方法 | 第57-60页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第57页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第57-58页 |
| 3.2.3 靶基因预测 | 第58页 |
| 3.2.4 载体构建 | 第58-59页 |
| 3.2.5 总RNA提取和反转录 | 第59页 |
| 3.2.6 实时定量PCR | 第59页 |
| 3.2.7 Western Blot | 第59-60页 |
| 3.2.8 荧光素酶报告基因检测 | 第60页 |
| 3.2.9 酶联免疫吸附试验 | 第60页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第60页 |
| 3.3 实验结果 | 第60-72页 |
| 3.3.1 预测miR-17-92基因簇调控的胰腺外分泌靶基因 | 第60-61页 |
| 3.3.2 胰腺细胞Ptfla基因的表达模式 | 第61-62页 |
| 3.3.3 miR-17、miR-20a和miR-18a对Pftla基因的调控 | 第62-64页 |
| 3.3.4 双荧光素酶报告系统验证靶基因 | 第64-65页 |
| 3.3.5 miR-17、miR-20a上调Ptfla表达的分析 | 第65-68页 |
| 3.3.6 miR-17、miR-20a和miR-18a对胰腺淀粉酶合成的调控 | 第68-71页 |
| 3.3.7 miR-17、miR-20a和miR-18a对羧肽酶CPAl基因的调控 | 第71-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-73页 |
| 3.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 4 miR-17-92基因簇miRNAs对β细胞的调控 | 第74-93页 |
| 4.1 试验材料 | 第74-75页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第74页 |
| 4.1.2 载体和miRNAs | 第74页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第74-75页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第75页 |
| 4.2 试验方法 | 第75-81页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第75页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第75-76页 |
| 4.2.3 靶基因预测 | 第76页 |
| 4.2.4 载体构建 | 第76-79页 |
| 4.2.5 总RNA提取和反转录 | 第79页 |
| 4.2.6 实时定量PCR | 第79页 |
| 4.2.7 Western Blot | 第79-80页 |
| 4.2.8 细胞免疫荧光染色 | 第80页 |
| 4.2.9 MIN6细胞内胰岛素提取 | 第80页 |
| 4.2.10 葡萄糖刺激的胰岛素释放实验 | 第80-81页 |
| 4.2.11 酶联免疫吸附试验 | 第81页 |
| 4.2.12 荧光素酶报告基因检测 | 第81页 |
| 4.2.13 统计学分析 | 第81页 |
| 4.3 实验结果 | 第81-90页 |
| 4.3.1 筛选miR-17-92基因簇调控的胰腺内分泌靶基因 | 第81-82页 |
| 4.3.2 荧光素酶报告系统验证靶基因 | 第82-84页 |
| 4.3.3 miR-17、miR-20a和miR-18a对Ngn3基因的调控 | 第84-85页 |
| 4.3.4 miR-18a上调Ngn3表达的初步分析 | 第85-88页 |
| 4.3.5 miR-17、miR-20a和miR-18a对β细胞胰岛素基因的调控 | 第88-90页 |
| 4.3.6 miR-17、miR-20a和miR-18a对胰岛素合成和分泌的调控 | 第90页 |
| 4.4 讨论 | 第90-92页 |
| 4.5 本章小结 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 英文缩写词表(Abbreviation) | 第103-104页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 附件 | 第107-108页 |
