滑液支原体血凝抑制试验与荧光定量PCR检测方法的建立与应用
| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩写和符号清单 | 第15-17页 |
| 文献综述 | 第17-30页 |
| 1 禽类支原体概述 | 第17-19页 |
| 2 滑液支原体研究进展 | 第19-25页 |
| 2.1 病原学 | 第19-20页 |
| 2.2 流行病学 | 第20-22页 |
| 2.3 致病机理 | 第22页 |
| 2.4 临床症状和病理变化 | 第22-23页 |
| 2.5 诊断 | 第23-24页 |
| 2.6 防治 | 第24-25页 |
| 3 支原体诊断方法的研究进展 | 第25-30页 |
| 3.1 病原分离 | 第25-26页 |
| 3.2 血清学诊断 | 第26-27页 |
| 3.3 分子生物学检测 | 第27-30页 |
| 引言 | 第30-32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-42页 |
| 1.1 菌株、血清和培养基 | 第32页 |
| 1.2 SPF鸡 | 第32页 |
| 1.3 鸡红细胞悬液的配制 | 第32页 |
| 1.4 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.5 主要仪器 | 第33-34页 |
| 1.6 MSHI试验检测方法的建立 | 第34-35页 |
| 1.6.1 抗原的制备 | 第34页 |
| 1.6.2 抗原效价的测定 | 第34页 |
| 1.6.3 抗原特异性检测 | 第34-35页 |
| 1.6.4 抗原保存期检测 | 第35页 |
| 1.6.5 阴性血清的准备 | 第35页 |
| 1.6.6 阳性血清的制备 | 第35页 |
| 1.6.7 HI试验检测方法的初步应用 | 第35页 |
| 1.7 MSqPCR检测方法的建立 | 第35-42页 |
| 1.7.1 qPCR引物设计与合成 | 第35页 |
| 1.7.2 菌液复苏与培养 | 第35页 |
| 1.7.3 基因组制备 | 第35-36页 |
| 1.7.4 目的基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 1.7.5 目的基因的回收 | 第37页 |
| 1.7.6 目的基因与pMD18-T载体连接 | 第37-38页 |
| 1.7.7 连接产物的转化 | 第38页 |
| 1.7.8 重组质粒DNA的提取、鉴定与测序 | 第38-39页 |
| 1.7.9 qPCR检测方法的建立 | 第39-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-59页 |
| 2.1 MSHI检测方法的建立 | 第42-48页 |
| 2.1.1 抗原的制备 | 第42页 |
| 2.1.2 抗原特异性检测 | 第42-43页 |
| 2.1.3 抗原保存期检测 | 第43-44页 |
| 2.1.4 阳性血清的制备 | 第44-45页 |
| 2.1.5 HI试验检测方法的初步应用 | 第45-48页 |
| 2.2 MSqPCR检测方法的建立 | 第48-59页 |
| 2.2.1 目的基因扩增结果 | 第48-49页 |
| 2.2.2 重组质粒PCR鉴定 | 第49页 |
| 2.2.3 质粒测序结果 | 第49页 |
| 2.2.4 qPCR反应条件的优化 | 第49页 |
| 2.2.5 qPCR方法的建立 | 第49-51页 |
| 2.2.6 敏感性试验 | 第51页 |
| 2.2.7 特异性试验 | 第51-52页 |
| 2.2.8 重复性试验 | 第52-53页 |
| 2.2.9 临床样品检测 | 第53-56页 |
| 2.2.10 MS人工感染鸡胚不同组织含毒量测定 | 第56-57页 |
| 2.2.11 MS人工感染SPF鸡后排毒情况检测 | 第57-59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| 3.1 MSHI试验检测方法的建立 | 第59-60页 |
| 3.2 MSqPCR检测方法的建立 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
