| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 符号说明及缩略词 | 第11-15页 |
| 第一章 综述部分:病原真菌黑色素研究进展 | 第15-35页 |
| 1 黑色素简介 | 第15-16页 |
| 2 真菌黑色素合成途径 | 第16-21页 |
| 3 真菌黑色素功能研究进展 | 第21-27页 |
| 4 病原真菌黑色素合成调节 | 第27-30页 |
| 5 病原真菌黑色素研究价值 | 第30页 |
| 6 本课题研究目的及意义 | 第30-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-50页 |
| 第一节 试验材料 | 第35页 |
| 第二节 试验方法 | 第35-50页 |
| 2.1 常规试验技术 | 第35-39页 |
| 2.2 转化片段构建 | 第39-40页 |
| 2.3 PEG介导的灰霉菌原生质体转化法 | 第40-41页 |
| 2.4 突变株筛选与鉴定 | 第41-42页 |
| 2.5 突变株回补载体构建 | 第42-43页 |
| 2.6 过表达载体构建 | 第43页 |
| 2.7 Southern杂交 | 第43-45页 |
| 2.8 黑色素染色观察 | 第45页 |
| 2.9 生长发育相关表型分析 | 第45-46页 |
| 2.10 致病相关表型分析 | 第46页 |
| 2.11 侵染过程分析 | 第46-47页 |
| 2.12 相关致病因子分泌检测 | 第47页 |
| 2.13 活性氧染色 | 第47-48页 |
| 2.14 显微观察方法 | 第48页 |
| 2.15 Q-PCR检测基因表达 | 第48页 |
| 2.16 转录组测序(RNAseq)分析 | 第48-50页 |
| 第三章 结果与分析 | 第50-98页 |
| 第一节 灰霉菌黑色素合成相关基因序列及表达分析 | 第50-56页 |
| 1.1 灰霉菌黑色素合成相关基因序列信息分析 | 第50-54页 |
| 1.2 灰霉菌不同发育时期黑色素合成途径相关基因表达存在差异 | 第54-55页 |
| 1.3 小结 | 第55-56页 |
| 第二节 灰霉菌黑色素合成途径相关基因bcpks13及bcbrn1功能分析 | 第56-70页 |
| 2.1 聚酮合酶编码基因bcpks13及还原酶编码基因bcbrn1缺失突变株以及bcbrn1基因过表达菌株的获得 | 第56-58页 |
| 2.2 各菌株生长发育表型分析 | 第58-61页 |
| 2.2.1 △bcpks13及△bcbrn1突变株黑色素合成受阻 | 第58-59页 |
| 2.2.2 △bcpks13及△bcbrn1突变株菌落生长速率加快 | 第59-60页 |
| 2.2.3 △bcpks13及△bcbrn1突变株分生孢子及菌核形成受阻 | 第60-61页 |
| 2.3 △bcpks13突变株致病性分析 | 第61-69页 |
| 2.3.1 △bcpks13及△bcbrn1突变株致病性增加 | 第61-62页 |
| 2.3.2 △bcpks13及△bcbrn1突变株侵染过程中快速形成大量侵染菌丝 | 第62-63页 |
| 2.3.3 △bcpks13及△bcbrn1突变株对寄主营养成分利用率提高 | 第63-65页 |
| 2.3.4 △bcpks13及△bcbrn1突变株分泌更多的细胞壁降解酶 | 第65-66页 |
| 2.3.5 △bcpks13及△bcbrn1突变株酸性物质分泌增加 | 第66-67页 |
| 2.3.6 △bcpks13及△bcbrn1突变株快速诱导互作体系产生大量活性氧 | 第67-69页 |
| 2.4 小结 | 第69-70页 |
| 第三节 灰霉菌黑色素合成途径脱水酶编码基因bcscd1功能分析 | 第70-83页 |
| 3.1 脱水酶编码基因bcscd1缺失突变株的获得 | 第70页 |
| 3.2 △bcscd1突变株生长发育表型分析 | 第70-75页 |
| 3.2.1 △bcscd1突变株产生橘红色色素 | 第70-71页 |
| 3.2.2 △bcscd1突变株菌落生长速率减慢 | 第71-72页 |
| 3.2.3 bcscd1缺失后影响灰霉菌产孢量、孢子形态及其萌发率 | 第72-75页 |
| 3.3 △bcscd1突变株致病差异分析 | 第75-79页 |
| 3.3.1 △bcscd1突变株致病性下降 | 第75-76页 |
| 3.3.2 △bcscd1突变株对寄主营养成分利用率下降 | 第76-77页 |
| 3.3.3 △bcscd1突变株细胞壁降解酶分泌能力差异比较 | 第77-78页 |
| 3.3.4 △bcscd1突变株酸性物质分泌减少 | 第78-79页 |
| 3.4 △bcscd1回补菌株的获得与功能验证 | 第79-82页 |
| 3.4.1 △bcscd1回补菌株鉴定 | 第79页 |
| 3.4.2 △bcscd1回补菌株菌落生长速率及色素形成恢复 | 第79-81页 |
| 3.4.3 △bcscd1回补菌株孢子形态及孢子萌发速率恢复 | 第81-82页 |
| 3.4.4 △bcscd1回补菌株致病性恢复 | 第82页 |
| 3.5 小结 | 第82-83页 |
| 第四节 转录组学分析灰霉菌黑色素合成相关基因影响其生长发育及致病性的分子机理 | 第83-98页 |
| 4.1 RNAseq质量控制 | 第83-84页 |
| 4.2 RNAseq数据分析 | 第84-96页 |
| 4.2.1 差异表达基因筛选 | 第84页 |
| 4.2.2 差异表达基因总体描述 | 第84-85页 |
| 4.2.3 差异表达基因参与代谢途径分析 | 第85-88页 |
| 4.2.4 差异表达基因参与的生物学过程分析 | 第88-89页 |
| 4.2.5 差异表达基因具体功能分析 | 第89-96页 |
| 4.3 小结 | 第96-98页 |
| 第四章 讨论 | 第98-104页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第104-107页 |
| 1 全文总结 | 第104-106页 |
| 2 展望 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-126页 |
| 附录 | 第126-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
