| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第16-24页 |
| 1.1 红树林生态系统 | 第16-18页 |
| 1.1.1 红树林生态系统简介 | 第16页 |
| 1.1.2 红树林生态系统特征 | 第16-17页 |
| 1.1.3 红树林沉积物微生物 | 第17-18页 |
| 1.2 功能基因筛选技术 | 第18-20页 |
| 1.2.1 微生物纯培养技术 | 第18-19页 |
| 1.2.2 宏基因组文库 | 第19页 |
| 1.2.3 宏基因组高通量测序技术 | 第19-20页 |
| 1.3 琼胶、琼胶寡糖及琼胶的降解方法 | 第20-22页 |
| 1.3.1 琼胶简介 | 第20页 |
| 1.3.2 琼胶寡糖简介 | 第20-21页 |
| 1.3.3 琼胶的降解方法 | 第21-22页 |
| 1.4 本论文的研究思路、目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 红树林沉积物原位富集与16SrRNA基因多样性分析 | 第24-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-25页 |
| 2.1.1 红树林沉积物原位富集 | 第24页 |
| 2.1.2 红树林沉积物环境DNA(eDNA)的提取 | 第24页 |
| 2.1.3 16SrRNA基因多样性分析 | 第24-25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.2.1 红树林沉积物原位富集结果 | 第25页 |
| 2.2.2 eDNA的提取及PCR扩增 | 第25-27页 |
| 2.2.3 16SrRNA基因多样性分析 | 第27-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-32页 |
| 3 红树林沉积物宏基因组高通量测序与琼胶酶的原核表达 | 第32-40页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-37页 |
| 3.1.1 检测eDNA样品 | 第32页 |
| 3.1.2 构建文库及高通量测序 | 第32页 |
| 3.1.3 生物信息分析流程 | 第32页 |
| 3.1.4 琼胶酶基因的PCR扩增及重组质粒的构建 | 第32-36页 |
| 3.1.5 粗琼胶酶的蛋白浓度和酶活的测定 | 第36页 |
| 3.1.6 粗重组琼胶酶最适反应条件的测定 | 第36-37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-38页 |
| 3.2.1 宏基因组测序结果 | 第37页 |
| 3.2.2 粗重组琼胶酶最适反应条件测定结果 | 第37-38页 |
| 3.3 讨论 | 第38-40页 |
| 4 重组琼胶酶AgaM1(rAgaM1)的克隆、表达、纯化与酶学性质及其降解产物的初步研究 | 第40-58页 |
| 4.1 材料与方法 | 第40-48页 |
| 4.1.1 琼胶酶基因agaM1序列分析 | 第40页 |
| 4.1.2 琼胶酶基因agaM1的PCR扩增及重组克隆质粒的构建 | 第40-41页 |
| 4.1.3 rAgaM1的诱导表达 | 第41页 |
| 4.1.4 rAgaM1的纯化与SDS-PAGE凝胶电泳 | 第41-44页 |
| 4.1.5 rAgaM1酶活力的测定 | 第44页 |
| 4.1.6 rAgaM1最适反应条件的测定 | 第44-45页 |
| 4.1.7 rAgaM1热稳定性及pH稳定性的测定 | 第45-46页 |
| 4.1.8 金属离子、螯合剂及变性剂对rAgaM1活性的影响 | 第46-47页 |
| 4.1.9 作用底物种类与琼脂糖浓度对rAgaM1活性的影响 | 第47页 |
| 4.1.10 rAgaM1的动力学参数测定 | 第47页 |
| 4.1.11 rAgaM1酶解产物的初步分析 | 第47-48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-56页 |
| 4.2.1 琼胶酶基因agaM1序列分析 | 第48-49页 |
| 4.2.2 琼胶酶基因agaM1的克隆表达 | 第49-50页 |
| 4.2.3 rAgaM1的纯化 | 第50页 |
| 4.2.4 rAgaM1的酶活力 | 第50-51页 |
| 4.2.5 rAgaM1最适反应温度和pH | 第51页 |
| 4.2.6 rAgaM1热稳定性及pH稳定性 | 第51-52页 |
| 4.2.7 金属离子、螯合剂及变性剂对rAgaM1活性的影响 | 第52-53页 |
| 4.2.8 作用底物种类与琼脂糖浓度对rAgaM1活性的影响 | 第53-54页 |
| 4.2.9 rAgaM1的动力学参数 | 第54-55页 |
| 4.2.10 rAgaM1的酶解产物 | 第55-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-58页 |
| 5 基因截短对rAgaM1活性影响的初步研究 | 第58-71页 |
| 5.1 材料与方法 | 第58-61页 |
| 5.1.1 agaM1基因的截短及重组克隆质粒的构建 | 第58-59页 |
| 5.1.2 截短基因重组蛋白的表达、纯化、SDS-PAGE凝胶电泳及酶活测定 | 第59页 |
| 5.1.3 截短基因重组蛋白最适反应温度和pH的测定 | 第59页 |
| 5.1.4 截短基因重组蛋白热稳定性及pH稳定性的测定 | 第59页 |
| 5.1.5 金属离子、螯合剂及变性剂对截短基因重组蛋白活性的影响 | 第59-60页 |
| 5.1.6 作用底物种类与琼脂糖浓度对截短基因重组蛋白活性的影响 | 第60-61页 |
| 5.1.7 截短基因重组蛋白的动力学参数测定 | 第61页 |
| 5.1.8 截短基因重组蛋白酶解产物的初步分析 | 第61页 |
| 5.2 结果与分析 | 第61-69页 |
| 5.2.1 截短基因的克隆表达结果 | 第61-62页 |
| 5.2.2 rAgaM1-01和rAgaM1-02最适反应温度和pH | 第62-63页 |
| 5.2.3 rAgaM1-01和rAgaM1-02热稳定性及pH稳定性 | 第63-65页 |
| 5.2.4 金属离子、螯合剂及变性剂对rAgaM1-01和rAgaM1-02活性的影响 | 第65-66页 |
| 5.2.5 作用底物种类与琼胶浓度对rAgaM1-01和rAgaM1-02活性的影响 | 第66-67页 |
| 5.2.6 rAgaM1-01和rAgaM1-02的动力学参数 | 第67-68页 |
| 5.2.7 rAgaM1-01和rAgaM1-02的酶解产物 | 第68-69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-71页 |
| 6 总结与展望 | 第71-73页 |
| 6.1 总结 | 第71页 |
| 6.2 展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录1 土壤DNA提取试剂盒实验步骤 | 第80-81页 |
| 附录2 普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒实验步骤 | 第81-82页 |
| 附录3 大肠杆菌感受态的制备与连接产物的转化 | 第82-83页 |
| 附录4 质粒提取试剂盒实验步骤 | 第83-84页 |
| 附录5 Ni柱亲和层析试剂盒实验步骤 | 第84-85页 |
| 附录6 DNS溶液配制步骤及注意事项 | 第85-86页 |
| 附录7 BCA法测定蛋白质浓度标准品和工作液制备步骤 | 第86-88页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
