| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 材料与方法 | 第10-23页 |
| 1 仪器、试剂和耗材 | 第10-13页 |
| 1.1 主要仪器 | 第10-11页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第11-12页 |
| 1.3 常用试剂配制 | 第12-13页 |
| 2 细胞系及胃癌组织标本的选择 | 第13页 |
| 2.1 细胞系的选择 | 第13页 |
| 2.2 胃癌组织标本的选择 | 第13页 |
| 3 细胞处理 | 第13-14页 |
| 3.1 实验前准备 | 第13页 |
| 3.2 首次传代前细胞的复苏 | 第13页 |
| 3.3 培养液的更换 | 第13-14页 |
| 3.4 细胞传代 | 第14页 |
| 4 FOXO1甲基化状态检测 | 第14-17页 |
| 4.1 细胞系DNA提取 | 第14页 |
| 4.2 DNA样本的焦亚硫酸盐修饰 | 第14-15页 |
| 4.3 亚硫酸盐基因组测序 | 第15-17页 |
| 5 FOXO1及相关基因mRNA检测 | 第17-18页 |
| 5.1 细胞系RNA提取 | 第17页 |
| 5.2 cDNA合成 | 第17-18页 |
| 5.3 实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR,qRT-PCR) | 第18页 |
| 5.4 qRT-PCR结果数据分析 | 第18页 |
| 6 FOXO1及相关蛋白检测 | 第18-22页 |
| 6.1 细胞系总蛋白的提取及浓度测量 | 第18-19页 |
| 6.2 Westernblotting检测细胞系中蛋白的表达 | 第19-20页 |
| 6.3 LY294002通路抑制剂作用后检测蛋白表达变化 | 第20-21页 |
| 6.4 石蜡切片免疫组织化学染色(SP法)检测胃癌组织中蛋白的表达 | 第21页 |
| 6.5 免疫组织化学染色结果分析 | 第21-22页 |
| 7 免疫荧光检测胃癌细胞中蛋白亚定位 | 第22页 |
| 8 统计学和图像分析 | 第22-23页 |
| 结果 | 第23-35页 |
| 1 qRT-PCR检测胃癌细胞系中基因的转录表达 | 第23-24页 |
| 2 FOXO1甲基化状态检测结果 | 第24-26页 |
| 2.1 胃癌细胞系中FOXO1基因启动子甲基化状态BGS检测结果 | 第24-25页 |
| 2.2 胃癌细胞系中FOXO1第1外显子甲基化状态BGS检测结果 | 第25-26页 |
| 3 胃癌细胞系中FOXO1和AKT的表达 | 第26-28页 |
| 4 LY294002通路抑制剂作用后FOXO1及相关蛋白表达变化 | 第28-29页 |
| 5 FOXO1及相关蛋白在胃癌细胞中的亚定位 | 第29-32页 |
| 6 FOXO1及相关蛋白在胃癌组织中的表达 | 第32-35页 |
| 讨论 | 第35-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 综述 | 第43-65页 |
| 综述参考文献 | 第55-65页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第65-66页 |
| 缩略词表 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
