内容提要 | 第1-9页 |
第一章 前言 | 第9-24页 |
1. 基质金属蛋白酶(MMP) | 第9-21页 |
·细胞外基质(ECM) 概述 | 第9页 |
·基质金属蛋白酶(MMPs)简介 | 第9-10页 |
·MMP 家族 | 第10-13页 |
·MMP 的分类 | 第13-16页 |
·MMP 的3D 结构 | 第16-17页 |
·MMPs 病理生理学 | 第17-21页 |
·MMP-3 的简介 | 第21页 |
2. pET 表达系统 | 第21页 |
3. 包涵体复性 | 第21-23页 |
·包涵体的形成 | 第21-22页 |
·包涵体的分离和洗涤 | 第22页 |
·包涵体的溶解 | 第22-23页 |
·复性包涵体蛋白 | 第23页 |
4. 本论文的研究目的和策略 | 第23-24页 |
第二章 间充质溶解素-1(MMP-3)催化域基因的克隆 | 第24-40页 |
1 仪器与材料 | 第24-26页 |
·主要仪器 | 第24页 |
·实验材料 | 第24-26页 |
·溶液配制 | 第26页 |
2 实验方法 | 第26-40页 |
·MMP-3 引物设计 | 第26-27页 |
·从人乳腺癌细胞中提取总RNA | 第27-28页 |
·RT-PCR | 第28-30页 |
·重组质粒的构建 | 第30-33页 |
·结果与讨论 | 第33-39页 |
·本章小结 | 第39-40页 |
第三章 MMP-3 催化域基因的表达及包涵体蛋白的分离与纯化 | 第40-48页 |
1 仪器与材料 | 第40-44页 |
·主要仪器 | 第40-41页 |
·实验材料 | 第41-42页 |
·实验菌株 | 第42页 |
·溶液配制 | 第42-44页 |
2 实验方法 | 第44-45页 |
3 结果和讨论 | 第45-48页 |
·MMP-3 的诱导表达 | 第45-46页 |
·包涵体的分离、洗涤及溶解 | 第46页 |
·包涵体蛋白的纯化 | 第46-47页 |
·结论 | 第47页 |
·本章小结 | 第47-48页 |
第四章 间质溶解素(MMP-3)包涵体的复性 | 第48-57页 |
1. 仪器与材料 | 第48-53页 |
·主要仪器 | 第48-49页 |
·实验材料 | 第49-50页 |
·溶液配制 | 第50-53页 |
2. 实验方法 | 第53-54页 |
·包涵体的复性 | 第53-54页 |
·酶活力检测 | 第54页 |
3. 结果与讨论 | 第54-56页 |
·包涵体的复性 | 第54-55页 |
·透析复性 | 第55-56页 |
4. 本章小结 | 第56-57页 |
第五章 展望 | 第57-58页 |
附录 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-64页 |
中文摘要 | 第64-65页 |
Abstract | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |