| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第17-31页 |
| 1.1 脂肪酶概述 | 第17-20页 |
| 1.1.1 脂肪酶定义 | 第17页 |
| 1.1.2 脂肪酶的来源 | 第17-19页 |
| 1.1.3 脂肪酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 常见的两种脂肪酶 | 第20-23页 |
| 1.2.1 Burkholderia cepacia脂肪酶的概述 | 第20-21页 |
| 1.2.2 Candida antarctica脂肪酶概述 | 第21-23页 |
| 1.3 手性药物 | 第23-25页 |
| 1.3.1 手性药物的研究现状 | 第23-24页 |
| 1.3.2 手性药物的制备方法 | 第24-25页 |
| 1.4 关于几种手性药物中间体 | 第25-29页 |
| 1.4.1 替卡格雷和4-氨基2-环戊烯-1-醇 | 第25-27页 |
| 1.4.2 依折麦布和对氟苯甲酰基丁酸 | 第27-29页 |
| 1.5 课题的研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 Burkholderia cepacia脂肪酶和折叠酶基因的克隆及其在大肠杆菌中表达 | 第31-49页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验仪器及材料 | 第31-33页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.2 实验材料 | 第32页 |
| 2.2.3 培养基 | 第32页 |
| 2.2.4 溶液及缓冲液 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-41页 |
| 2.3.1 洋葱伯克霍尔德氏菌的培养及其基因组的提取 | 第33页 |
| 2.3.2 脂肪酶A重组质粒的构建 | 第33-36页 |
| 2.3.3 折叠酶B重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.4 脂肪酶、折叠酶的诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.3.5 重组折叠酶B的纯化 | 第38页 |
| 2.3.6 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第38页 |
| 2.3.7 包涵体BCLA的变性与复性 | 第38-39页 |
| 2.3.8 pNPP法测定脂肪酶的活力 | 第39-40页 |
| 2.3.9 测定BCLA蛋白质含量 | 第40-41页 |
| 2.4 结果分析与讨论 | 第41-47页 |
| 2.4.1 Burkholderia cepacia基因组的检测 | 第41页 |
| 2.4.2 BCLA和BCLB基因克隆 | 第41-42页 |
| 2.4.3 pMD18T-BCLA/BCLB质粒构建 | 第42页 |
| 2.4.4 大肠杆菌表达载体pET28(a+)-BCLA和pET28(a+)-BCLB重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 2.4.5 大肠杆菌基因工程菌的诱导表达 | 第43-44页 |
| 2.4.6 脂肪酶A的纯化 | 第44页 |
| 2.4.7 重组折叠酶B的纯化 | 第44-45页 |
| 2.4.8 包涵体BCLA的变性与复性 | 第45-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 BCLA对替卡格雷中间体拆分活性的研究 | 第49-61页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 实验仪器及材料 | 第49页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第49页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 3.3.1 BCLA拆分替卡格雷药物中间体1 | 第50页 |
| 3.3.2 BCLA拆分替卡格雷药物中间体2 | 第50页 |
| 3.3.3 BCLA拆分替卡格雷药物中间体3 | 第50页 |
| 3.3.4 BCLA拆分替卡格雷药物中间体4 | 第50页 |
| 3.3.5 BCLA底物谱的研究 | 第50-51页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第51-58页 |
| 3.4.1 BCLA拆分替卡格雷药物中间体1 | 第51-52页 |
| 3.4.2 BCLA拆分替卡格雷药物中间体2 | 第52-53页 |
| 3.4.3 BCLA拆分替卡格雷药物中间体3 | 第53页 |
| 3.4.4 BCLA拆分替卡格雷药物中间体4 | 第53-54页 |
| 3.4.5 BCLA对其他药物中间体拆分的研究 | 第54-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-61页 |
| 第四章 BCLA拆分替卡格雷中间体反应条件的优化 | 第61-67页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验仪器及材料 | 第61页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第61页 |
| 4.2.2 实验材料 | 第61页 |
| 4.2.3 溶液及缓冲液 | 第61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-63页 |
| 4.3.1 最适温度的测定 | 第61-62页 |
| 4.3.2 最适pH的测定 | 第62页 |
| 4.3.3 不同金属离子对酶活的影响 | 第62页 |
| 4.3.4 最适反应时间 | 第62页 |
| 4.3.5 在最适条件下的底物拆分结果 | 第62-63页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第63-66页 |
| 4.4.1 最适温度的测定 | 第63页 |
| 4.4.2 最适pH的测定 | 第63-64页 |
| 4.4.3 不同离子对底物拆分的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.4 最适反应时间 | 第65页 |
| 4.4.5 在最适条件下的底物拆分结果 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 依折麦布外消旋中间体的合成及检测条件确定 | 第67-75页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 实验仪器及材料 | 第67页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第67页 |
| 5.2.2 实验材料 | 第67页 |
| 5.3 实验方法 | 第67-70页 |
| 5.3.1 依折麦布中间体1的合成 | 第68-69页 |
| 5.3.2 依折麦布中间体2的合成 | 第69页 |
| 5.3.3 依折麦布中间体3的合成 | 第69-70页 |
| 5.3.4 依折麦布中间体对映异构体检测条件的确定 | 第70页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第70-73页 |
| 5.4.1 依折麦布中间体1的合成 | 第70页 |
| 5.4.2 依折麦布中间体2的合成 | 第70-71页 |
| 5.4.3 依折麦布中间体3的合成 | 第71页 |
| 5.4.4 依折麦布中间体对映异构体检测条件的确定 | 第71-73页 |
| 5.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第六章 脂肪酶CALB拆分依折麦布中间体的研究 | 第75-81页 |
| 6.1 引言 | 第75页 |
| 6.2 实验仪器及材料 | 第75页 |
| 6.2.1 实验仪器 | 第75页 |
| 6.2.2 实验材料 | 第75页 |
| 6.3 实验方法 | 第75-76页 |
| 6.3.1 CALB对依折麦布中间体水解反应的研究 | 第75-76页 |
| 6.3.2 CALB对依折麦布中间体1转酯化反应的研究 | 第76页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第76-79页 |
| 6.4.1 CALB对依折麦布中间体水解反应的研究 | 第76-78页 |
| 6.4.2 CALB对依折麦布中间体转酯化反应的研究 | 第78-79页 |
| 6.5 本章小结 | 第79-81页 |
| 第七章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 附录 | 第87-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第99-101页 |
| 作者与导师简介 | 第101-102页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第102-103页 |
