| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 猪流行性腹泻的概述 | 第12页 |
| 1.2 PEDV的生物学特征 | 第12-15页 |
| 1.2.1 PEDV的分类地位及生物学特征 | 第12-13页 |
| 1.2.2 PEDV基因组及其各段编码蛋白功能 | 第13-15页 |
| 1.2.3 开放阅读框3(ORF3)及其编码的SNE蛋白 | 第15页 |
| 1.3 猪流行性腹泻病毒体内外感染的特性 | 第15-16页 |
| 1.3.1 体内致病性 | 第15-16页 |
| 1.3.2 体外培养特征 | 第16页 |
| 1.4 PED免疫学研究概况 | 第16-18页 |
| 1.4.1 PEDV感染仔猪后的免疫反应 | 第16页 |
| 1.4.2 PEDV感染后的抗体产生及其保护作用 | 第16-17页 |
| 1.4.3 PED的疫苗研究 | 第17-18页 |
| 1.5 PED诊断方法的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5.1 免疫电镜法 | 第18页 |
| 1.5.2 免疫荧光法 | 第18页 |
| 1.5.3 微量血清中和试验 | 第18页 |
| 1.5.4 ELISA法 | 第18-19页 |
| 1.5.5 RT-PCR法 | 第19页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料及方法 | 第20-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 猪小肠和粪便病料 | 第20页 |
| 2.1.2 细胞与病毒 | 第20页 |
| 2.1.3 菌种 | 第20页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.5 引物 | 第20-21页 |
| 2.1.6 细胞培养液及分子生物学试剂 | 第21页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.8 试验用缓冲液及培养基 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 PEDV序列的测定 | 第23-25页 |
| 2.2.2 PEDV HLJ-2012株兔源抗体对LJB/03株的中和试验 | 第25-26页 |
| 2.2.3 PEDV HLJ-2012株的分离培养 | 第26-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-45页 |
| 3.1 PEDV流行毒株S基因S1区的扩增 | 第29页 |
| 3.2 病毒S基因S1区的克隆和序列分析 | 第29-32页 |
| 3.3 基于S基因S1区的遗传演化关系 | 第32-33页 |
| 3.4 HLJ-2012株结构基因、ORF3基因分子鉴定及遗传变异分析 | 第33-39页 |
| 3.4.1 PEDV HLJ-2012株S、E、M、N及ORF3基因的扩增 | 第33页 |
| 3.4.2 S、E、M、N及ORF3基因的克隆及序列测定 | 第33-34页 |
| 3.4.3 S基因序列分析及S蛋白抗原区域、抗原表位分析 | 第34页 |
| 3.4.4 N基因序列分析 | 第34页 |
| 3.4.5 M和E基因的序列分析 | 第34-36页 |
| 3.4.6 ORF3的序列分析 | 第36页 |
| 3.4.7 基于S基因的遗传演化关系 | 第36-37页 |
| 3.4.8 基于N、M、E基因的遗传演化关系 | 第37-39页 |
| 3.5 LJB/03株TCID50的测定结果 | 第39页 |
| 3.6 N蛋白表达并纯化 | 第39-40页 |
| 3.7 间接ELISA检测家兔体内抗体水平 | 第40页 |
| 3.8 中和试验检测抗体水平 | 第40-41页 |
| 3.9 病毒HLJ-2012株在vero细胞上的培养 | 第41-42页 |
| 3.10 间接免疫荧光检测结果 | 第42页 |
| 3.11 直接负染电镜法观察病毒结果 | 第42-43页 |
| 3.12 间接ELISA检测结果 | 第43页 |
| 3.13 RT-PCR检测的结果 | 第43页 |
| 3.14 原始毒与传代毒M基因部分片段的分析结果 | 第43-44页 |
| 3.15 HLJ-2012分离毒TCID50的测定结果 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 病料检测结果及病毒遗传变异情况 | 第45页 |
| 4.2 基于S基因的序列分析及进化树分析 | 第45-46页 |
| 4.3 关于N基因的序列分析 | 第46页 |
| 4.4 关于M基因的序列分析 | 第46-47页 |
| 4.5 关于E基因的序列分析 | 第47页 |
| 4.6 关于ORF3的序列分析 | 第47页 |
| 4.7 关于HLJ-2012株兔源抗体对LJB/03株的中和试验的分析 | 第47-48页 |
| 4.8 PEDV HLJ-2012株在vero细胞上的分离培养 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |
