| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 细菌毒力岛(PAI)概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 毒力岛概念及其特征 | 第13-14页 |
| 1.1.2 毒力岛的获得与进化 | 第14-15页 |
| 1.1.3 毒力岛在细菌进化中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2 耶尔森强毒力岛(HPI)概述 | 第16-20页 |
| 1.2.1 HPI的基本特征与分类 | 第16-17页 |
| 1.2.2 HPI的结构与功能 | 第17-20页 |
| 1.3 家禽沙门氏菌感染机制及相关毒力因子研究进展 | 第20-25页 |
| 1.3.1 家禽沙门氏菌感染过程 | 第21-23页 |
| 1.3.2 沙门氏菌感染过程中主要毒力因子 | 第23-25页 |
| 1.4 巨噬细胞及其在沙门氏菌感染中的作用 | 第25-28页 |
| 1.4.1 活化巨噬细胞对沙门氏菌的清除 | 第25-27页 |
| 1.4.2 巨噬细胞作为沙门氏菌的宿主 | 第27-28页 |
| 1.5 本项目研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-33页 |
| 2.1.1 细菌、细胞与DNA | 第29-30页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第30页 |
| 2.1.3 主要生物制剂与化学试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第31-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-54页 |
| 2.2.1 实验设计 | 第33页 |
| 2.2.2 HPI阳性沙门氏菌的筛选、分离与培养 | 第33-38页 |
| 2.2.3 HPI阳性沙门氏菌的分析 | 第38-43页 |
| 2.2.4 Red同源重组系统敲除沙门氏菌HPI | 第43-46页 |
| 2.2.5 沙门氏菌感染鸡巨噬细胞及相关指标检测 | 第46-53页 |
| 2.2.6 数据处理 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-74页 |
| 3.1 HPI阳性沙门氏菌的筛选 | 第54-57页 |
| 3.1.1 HPI阳性沙门氏菌二联PCR检测方法的建立 | 第54-56页 |
| 3.1.2 HPI阳性沙门氏菌的检测 | 第56-57页 |
| 3.2 HPI阳性沙门氏菌的分析 | 第57-60页 |
| 3.2.1 沙门氏菌HPI核心区域分析 | 第57页 |
| 3.2.2 沙门氏菌HPI插入序列分析 | 第57-58页 |
| 3.2.3 沙门氏菌HPI的Southern bloting分析 | 第58页 |
| 3.2.4 HPI阳性沙门氏菌摄铁能力分析 | 第58-60页 |
| 3.2.5 HPI阳性沙门氏菌抗生素抗性分析 | 第60页 |
| 3.3 沙门氏菌HPI全岛缺失株构建 | 第60-62页 |
| 3.3.1 沙门氏菌HPI基因敲除 | 第60-61页 |
| 3.3.2 HPI缺失株沙门氏菌检验 | 第61-62页 |
| 3.4 鸡iNOS间接ELISA检测方法的建立 | 第62-66页 |
| 3.4.1 鸡iNOS的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第62-64页 |
| 3.4.2 兔抗鸡iNOS多克隆抗体生物活性检验 | 第64-65页 |
| 3.4.3 兔抗鸡iNOS多克隆抗体效价测定与间接ELISA体系的确定 | 第65-66页 |
| 3.5 鸡IL-12、18和TNF-αmRNA Real-time PCR检测方法的建立 | 第66-69页 |
| 3.5.1 鸡IL-12、18,TNF-α与β-actin目的片段扩增 | 第66页 |
| 3.5.2 Real-time PCR扩增、熔解及标准曲线绘制 | 第66-69页 |
| 3.6 沙门氏菌感染对巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第69-70页 |
| 3.7 沙门氏菌感染对巨噬细胞iNOS表达量的影响 | 第70-71页 |
| 3.8 沙门氏菌感染对巨噬细胞IL-12、18和TNF-α mRNA表达量的影响 | 第71-74页 |
| 4 讨论 | 第74-80页 |
| 4.1 HPI阳性沙门氏菌的筛选 | 第74页 |
| 4.2 HPI阳性沙门氏菌HPI基因的基本结构、功能及其获得机制 | 第74-75页 |
| 4.3 沙门氏菌HPI基因的敲除 | 第75-78页 |
| 4.4 沙门氏菌HPI对鸡巨噬细胞功能的影响 | 第78-80页 |
| 5 结论 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 附录 | 第91-92页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第92页 |
