| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 课题研究的背景和意义 | 第10页 |
| 1.2 国内外在该方向的研究现状及分析 | 第10-15页 |
| 1.2.1 心血管疾病简介及研究现状 | 第10-11页 |
| 1.2.2 唾液酸的研究现状 | 第11-14页 |
| 1.2.3 心血管疾病、细胞损伤与唾液酸的改变 | 第14-15页 |
| 1.3 唾液酸糖基转移酶的概述 | 第15-18页 |
| 1.3.1 唾液酸糖基转移酶的种类及作用 | 第15-16页 |
| 1.3.2 唾液酸糖基转移酶的晶体结构 | 第16页 |
| 1.3.3 唾液酸糖基转移酶催化反应机理 | 第16-17页 |
| 1.3.4 α-2,6 唾液酸糖基转移酶 | 第17-18页 |
| 1.3.5 α-2,3 唾液酸糖基转移酶 | 第18页 |
| 1.4 常用的唾液酸检测方法 | 第18-20页 |
| 1.4.1 凝集素检测唾液酸 | 第19-20页 |
| 1.4.2 荧光光度法检测唾液酸 | 第20页 |
| 1.4.3 色谱检测唾液酸 | 第20页 |
| 1.5 唾液酸脱落诱导因子 | 第20-21页 |
| 1.5.1 LPS 的概述 | 第20-21页 |
| 1.5.2 LPS 对内皮损伤机制的影响 | 第21页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第21-24页 |
| 1.6.1 诱导血管内皮细胞损伤 | 第22页 |
| 1.6.2 流式细胞术分析 HUVEC 表面唾液酸变化 | 第22页 |
| 1.6.3 激光共聚焦分析 HUVEC 表面唾液酸变化 | 第22页 |
| 1.6.4 qRT-PCR 分析 HUVEC 唾液酸糖基转移酶的表达变化 | 第22-23页 |
| 1.6.5 实验技术路线图 | 第23-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第24页 |
| 2.1.2 实验仪器及耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.3 试剂的配制 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第25-26页 |
| 2.2.2 细胞传代培养 | 第26页 |
| 2.2.3 细胞铺板 | 第26页 |
| 2.2.4 LPS 诱导细胞损伤 | 第26页 |
| 2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第26-27页 |
| 2.2.6 激光共聚焦显微镜检测细胞表面唾液酸变化 | 第27页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测细胞表面唾液酸变化 | 第27-28页 |
| 2.2.8 RT-PCR 检测唾液酸糖基转移酶表达 | 第28-30页 |
| 第3章 LPS 诱发血管内皮细胞损伤及唾液酸变化分析 | 第30-55页 |
| 3.1 LPS 诱导 HUVEC 细胞损伤模型的建立 | 第30-32页 |
| 3.1.1 LPS 作用浓度的确定 | 第30-32页 |
| 3.1.2 LPS 作用时间的确定 | 第32页 |
| 3.2 LPS 处理后细胞表面α-2,6 唾液酸变化的研究 | 第32-42页 |
| 3.2.1 流式细胞仪分析α-2,6 唾液酸变化 | 第33-37页 |
| 3.2.2 激光共聚焦显微镜分析α-2,6 唾液酸的变化 | 第37-42页 |
| 3.3 LPS 处理后细胞表面α-2,3 唾液酸的变化 | 第42-49页 |
| 3.3.1 流式细胞仪分析α-2,3 唾液酸变化 | 第42-46页 |
| 3.3.2 激光共聚焦显微镜分析α-2,3 唾液酸的变化 | 第46-49页 |
| 3.4 LPS 作用长时间后唾液酸的变化分析 | 第49-52页 |
| 3.4.1 LPS 处理 48 h 后 SNA 标记流式结果 | 第49-50页 |
| 3.4.2 LPS 处理 48 h 后 MAA 标记流式结果 | 第50-52页 |
| 3.5 讨论 | 第52-53页 |
| 3.6 本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 LPS 诱发血管内皮细胞损伤机制的初步分析 | 第55-63页 |
| 4.1 细胞内唾液酸糖基转移酶的表达分析 | 第55-57页 |
| 4.1.1 引物的有效性 | 第55-56页 |
| 4.1.2 引物的溶解曲线 | 第56-57页 |
| 4.2 实时定量分析唾液酸糖基转移酶的表达变化 | 第57-61页 |
| 4.2.1 LPS 诱导损伤后细胞内 ST6-1 的表达变化 | 第57-58页 |
| 4.2.2 唾液酸糖基转移酶 ST3-1 的 qRT-PCR 结果 | 第58-60页 |
| 4.2.3 LPS 诱导损伤后细胞内 ST3-4 的表达变化 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
