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四个番茄MIKC~C型MADS-box基因的功能研究

中文摘要第3-5页
英文摘要第5-7页
缩略词表第13-15页
1 绪论第15-39页
    1.1 MADS-box转录因子家族的国内外研究进展第15-23页
        1.1.1 MADS-box蛋白的命名第15页
        1.1.2 MADS-box蛋白的分类和结构特征第15-17页
        1.1.3 MADS-box蛋白的功能第17-23页
    1.2 乙烯与番茄果实成熟调控第23-30页
        1.2.1 乙烯的生物合成第24-26页
        1.2.2 乙烯信号转导第26-28页
        1.2.3 番茄果实成熟突变体第28-30页
    1.3 乙烯与赤霉素第30-31页
    1.4 乙烯与非生物胁迫第31-33页
    1.5 课题的提出及研究意义第33-34页
    1.6 课题的研究内容与技术路线第34-39页
        1.6.1 课题的研究内容第34-35页
        1.6.2 课题研究的技术路线第35-38页
        1.6.3 课题研究的创新点第38-39页
2 番茄SlMBP8基因的功能研究第39-109页
    2.1 引言第39页
    2.2 材料、仪器和试剂第39-51页
        2.2.1 实验材料第39-42页
        2.2.2 仪器和设备第42-43页
        2.2.3 试剂与培养基第43-51页
    2.3 实验方法第51-77页
        2.3.1 番茄基因组DNA的提取第51页
        2.3.2 番茄总RNA的提取第51-52页
        2.3.3 反转录第52页
        2.3.4 基因克隆第52-54页
        2.3.5 大肠杆菌感受态的制备第54页
        2.3.6 质粒的转化第54-55页
        2.3.7 挑取阳性单克隆并进行菌落PCR第55页
        2.3.8 菌落增殖第55页
        2.3.9 质粒提取第55-56页
        2.3.10 SlMBP8基因的生物信息学分析第56页
        2.3.11 SlMBP8基因的表达模式研究第56-59页
        2.3.12 SlMBP8基因响应非生物胁迫的表达模式分析第59-60页
        2.3.13 SlMBP8基因响应激素处理的表达模式分析第60页
        2.3.14 SlMBP8沉默载体的构建第60-63页
        2.3.15 pBIN19- SlMBP8质粒的农杆菌结合转移第63-64页
        2.3.16 农杆菌侵染番茄子叶第64-65页
        2.3.17 转基因株系的筛选第65-66页
        2.3.18 转基因效率鉴定第66页
        2.3.19 番茄果皮类胡萝卜素含量测定第66页
        2.3.20 番茄果实乙烯含量测定第66页
        2.3.21 果实耐储实验第66-67页
        2.3.22 实时定量PCR分析转基因对成熟相关基因表达量的影响第67-68页
        2.3.23 SlMBP8与SlMADS-RIN蛋白互作的研究第68-75页
        2.3.24 SlMBP8沉默转基因株系的抗盐胁迫分析第75页
        2.3.25 SlMBP8沉默转基因株系的抗干旱胁迫分析第75-76页
        2.3.26 SlMBP8沉默转基因株系胁迫情况下各生理指标的测定第76页
        2.3.27 实时定量PCR分析转基因对胁迫相关基因表达量的影响第76-77页
    2.4 结果与分析第77-105页
        2.4.1 SlMBP8与其它的MADS-box蛋白的进化树及同源比对第77-79页
        2.4.2 SlMBP8蛋白氨基酸组成第79-80页
        2.4.3 SlMBP8蛋白的二级结构第80-81页
        2.4.4 SlMBP8蛋白的理化性质分析及亚细胞定位第81页
        2.4.5 SlMBP8基因启动子富含的顺式元件分析第81-82页
        2.4.6 SlMBP8基因的表达模式预测分析第82页
        2.4.7 SlMBP8基因的表达模式研究第82-85页
        2.4.8 SlMBP8沉默转基因株系的培育及筛选第85页
        2.4.9 SlMBP8沉默株系的鉴定第85-87页
        2.4.10 SlMBP8沉默株系的表型及分析第87-88页
        2.4.11 果实总类胡萝卜素含量及相关基因表达分析第88-89页
        2.4.12 SlMBP8 沉默果实中乙烯合成、乙烯信号转导以及果实成熟相关基因的表达分析第89-91页
        2.4.13 乙烯含量测定及三重反应第91-93页
        2.4.14 SlMBP8与SlMADS-RIN的互作研究第93-94页
        2.4.15 SlMBP8沉默转基因株系果皮细胞壁代谢相关基因检测第94-96页
        2.4.16 SlMBP8沉默转基因株系果实耐储性检测第96页
        2.4.17 SlMBP8基因的激素处理表达模式分析第96-97页
        2.4.18 SlMBP8基因的非生物胁迫处理表达模式分析第97-98页
        2.4.19 SlMBP8基因的沉默增强了番茄对盐胁迫的耐受性第98-100页
        2.4.20 沉默SlMBP8基因促进盐胁迫相关基因的表达第100-102页
        2.4.21 SlMBP8基因的沉默增强了番茄对干旱胁迫的耐受性第102-104页
        2.4.22 沉默SlMBP8基因促进脱水胁迫相关基因的表达第104-105页
    2.5 讨论第105-108页
        2.5.1 SlMBP8基因在番茄果实成熟中的功能第105-106页
        2.5.2 SlMBP8基因在非生物胁迫响应中的功能第106-108页
    2.6 本章小结第108-109页
3 番茄SlMBP15基因的功能研究第109-131页
    3.1 引言第109页
    3.2 材料、试剂与仪器第109页
        3.2.1 材料第109页
        3.2.2 仪器、设备第109页
        3.2.3 试剂与培养基第109页
    3.3 实验方法第109-115页
        3.3.1 SlMBP15基因的克隆第109页
        3.3.2 SlMBP15基因的生物信息学分析第109页
        3.3.3 SlMBP15基因的表达模式分析第109-110页
        3.3.4 SlMBP15基因响应非生物胁迫的表达模式分析第110页
        3.3.5 SlMBP15基因响应激素处理的表达模式分析第110页
        3.3.6 SlMBP15沉默载体的构建第110-113页
        3.3.7 pBIN19- SlMBP15质粒的农杆菌结合转移第113页
        3.3.8 农杆菌侵染番茄子叶第113页
        3.3.9 转基因株系的筛选第113页
        3.3.10 转基因效率鉴定第113页
        3.3.11 番茄果皮类胡萝卜素含量测定第113页
        3.3.12 番茄果实乙烯含量测定第113页
        3.3.13 果实耐储实验第113页
        3.3.14 实时定量 PCR 分析转基因对成熟相关基因表达量的影响第113页
        3.3.15 SlMBP15与SlMADS-RIN蛋白互作的研究第113-114页
        3.3.16 植物內源激素的测定第114页
        3.3.17 实时定量PCR分析沉默SlMBP15基因对赤霉素相关基因表达量的影响第114-115页
    3.4 结果与分析第115-129页
        3.4.1 SlMBP15与其它的MADS-box蛋白的同源比对及系统发育分析第115-116页
        3.4.2 SlMBP15蛋白氨基酸组成第116-118页
        3.4.3 SlMBP15蛋白的二级结构第118页
        3.4.4 SlMBP15蛋白的理化性质分析及亚细胞定位第118页
        3.4.5 SlMBP15基因启动子富含的顺式元件分析第118-119页
        3.4.6 SlMBP15基因的表达模式研究第119页
        3.4.7 SlMBP15沉默转基因株系的培育及筛选第119-120页
        3.4.8 SlMBP15在沉默株系中的表达第120-121页
        3.4.9 SlMBP15沉默株系果实的表型及分析第121-122页
        3.4.10 果实总类胡萝卜素的提取第122-123页
        3.4.11 果实乙烯合成的测定第123-125页
        3.4.12 实时定量PCR分析沉默SlMBP15对乙烯合成及信号转导等相关基因的影响第125页
        3.4.13 SlMBP15与SlMADS-RIN的互作研究第125-126页
        3.4.14 沉默转基因植株出现矮化的表型第126-128页
        3.4.15 赤霉素含量测定及相关基因表达水平测定第128-129页
    3.5 讨论第129-130页
        3.5.1 SlMBP15基因在番茄果实成熟中的功能第129页
        3.5.2 SlMBP15基因参与调控赤霉素合成及响应第129-130页
    3.6 本章小结第130-131页
4 番茄FUL1&FUL2基因的功能研究第131-143页
    4.1 引言第131页
    4.2 材料、试剂与仪器第131页
    4.3 实验方法第131-132页
        4.3.1 FUL1&FUL2基因的表达模式分析第131页
        4.3.2 沉默载体的构建第131-132页
    4.4 结果与分析第132-141页
        4.4.1 FUL1&FUL2蛋白氨基酸组成第132-133页
        4.4.2 FUL1&FUL2蛋白的二级结构第133-134页
        4.4.3 FUL1&FUL2蛋白的理化性质分析及亚细胞定位第134-135页
        4.4.4 FUL1&FUL2基因的表达模式预测分析第135-136页
        4.4.5 FUL1&FUL2基因的表达模式分析第136-137页
        4.4.6 沉默转基因果实的表型第137-138页
        4.4.7 FUL1&FUL2双沉默转基因果实沉默效率检测第138-139页
        4.4.8 类胡萝卜素的含量测定及关键合成基因的检测第139-140页
        4.4.9 乙烯含量测定及相关基因表达量的分析第140-141页
    4.5 讨论第141-142页
    4.6 本章小结第142-143页
5 结论与展望第143-147页
    5.1 主要结论第143-144页
    5.2 展望第144-147页
致谢第147-149页
参考文献第149-165页
附录第165-166页
    A. 作者在攻读博士期间发表的论文目录第165-166页
    B. 作者在攻读博士期间发明的专利第166页

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