中文摘要 | 第3-5页 |
英文摘要 | 第5-7页 |
缩略词表 | 第13-15页 |
1 绪论 | 第15-39页 |
1.1 MADS-box转录因子家族的国内外研究进展 | 第15-23页 |
1.1.1 MADS-box蛋白的命名 | 第15页 |
1.1.2 MADS-box蛋白的分类和结构特征 | 第15-17页 |
1.1.3 MADS-box蛋白的功能 | 第17-23页 |
1.2 乙烯与番茄果实成熟调控 | 第23-30页 |
1.2.1 乙烯的生物合成 | 第24-26页 |
1.2.2 乙烯信号转导 | 第26-28页 |
1.2.3 番茄果实成熟突变体 | 第28-30页 |
1.3 乙烯与赤霉素 | 第30-31页 |
1.4 乙烯与非生物胁迫 | 第31-33页 |
1.5 课题的提出及研究意义 | 第33-34页 |
1.6 课题的研究内容与技术路线 | 第34-39页 |
1.6.1 课题的研究内容 | 第34-35页 |
1.6.2 课题研究的技术路线 | 第35-38页 |
1.6.3 课题研究的创新点 | 第38-39页 |
2 番茄SlMBP8基因的功能研究 | 第39-109页 |
2.1 引言 | 第39页 |
2.2 材料、仪器和试剂 | 第39-51页 |
2.2.1 实验材料 | 第39-42页 |
2.2.2 仪器和设备 | 第42-43页 |
2.2.3 试剂与培养基 | 第43-51页 |
2.3 实验方法 | 第51-77页 |
2.3.1 番茄基因组DNA的提取 | 第51页 |
2.3.2 番茄总RNA的提取 | 第51-52页 |
2.3.3 反转录 | 第52页 |
2.3.4 基因克隆 | 第52-54页 |
2.3.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第54页 |
2.3.6 质粒的转化 | 第54-55页 |
2.3.7 挑取阳性单克隆并进行菌落PCR | 第55页 |
2.3.8 菌落增殖 | 第55页 |
2.3.9 质粒提取 | 第55-56页 |
2.3.10 SlMBP8基因的生物信息学分析 | 第56页 |
2.3.11 SlMBP8基因的表达模式研究 | 第56-59页 |
2.3.12 SlMBP8基因响应非生物胁迫的表达模式分析 | 第59-60页 |
2.3.13 SlMBP8基因响应激素处理的表达模式分析 | 第60页 |
2.3.14 SlMBP8沉默载体的构建 | 第60-63页 |
2.3.15 pBIN19- SlMBP8质粒的农杆菌结合转移 | 第63-64页 |
2.3.16 农杆菌侵染番茄子叶 | 第64-65页 |
2.3.17 转基因株系的筛选 | 第65-66页 |
2.3.18 转基因效率鉴定 | 第66页 |
2.3.19 番茄果皮类胡萝卜素含量测定 | 第66页 |
2.3.20 番茄果实乙烯含量测定 | 第66页 |
2.3.21 果实耐储实验 | 第66-67页 |
2.3.22 实时定量PCR分析转基因对成熟相关基因表达量的影响 | 第67-68页 |
2.3.23 SlMBP8与SlMADS-RIN蛋白互作的研究 | 第68-75页 |
2.3.24 SlMBP8沉默转基因株系的抗盐胁迫分析 | 第75页 |
2.3.25 SlMBP8沉默转基因株系的抗干旱胁迫分析 | 第75-76页 |
2.3.26 SlMBP8沉默转基因株系胁迫情况下各生理指标的测定 | 第76页 |
2.3.27 实时定量PCR分析转基因对胁迫相关基因表达量的影响 | 第76-77页 |
2.4 结果与分析 | 第77-105页 |
2.4.1 SlMBP8与其它的MADS-box蛋白的进化树及同源比对 | 第77-79页 |
2.4.2 SlMBP8蛋白氨基酸组成 | 第79-80页 |
2.4.3 SlMBP8蛋白的二级结构 | 第80-81页 |
2.4.4 SlMBP8蛋白的理化性质分析及亚细胞定位 | 第81页 |
2.4.5 SlMBP8基因启动子富含的顺式元件分析 | 第81-82页 |
2.4.6 SlMBP8基因的表达模式预测分析 | 第82页 |
2.4.7 SlMBP8基因的表达模式研究 | 第82-85页 |
2.4.8 SlMBP8沉默转基因株系的培育及筛选 | 第85页 |
2.4.9 SlMBP8沉默株系的鉴定 | 第85-87页 |
2.4.10 SlMBP8沉默株系的表型及分析 | 第87-88页 |
2.4.11 果实总类胡萝卜素含量及相关基因表达分析 | 第88-89页 |
2.4.12 SlMBP8 沉默果实中乙烯合成、乙烯信号转导以及果实成熟相关基因的表达分析 | 第89-91页 |
2.4.13 乙烯含量测定及三重反应 | 第91-93页 |
2.4.14 SlMBP8与SlMADS-RIN的互作研究 | 第93-94页 |
2.4.15 SlMBP8沉默转基因株系果皮细胞壁代谢相关基因检测 | 第94-96页 |
2.4.16 SlMBP8沉默转基因株系果实耐储性检测 | 第96页 |
2.4.17 SlMBP8基因的激素处理表达模式分析 | 第96-97页 |
2.4.18 SlMBP8基因的非生物胁迫处理表达模式分析 | 第97-98页 |
2.4.19 SlMBP8基因的沉默增强了番茄对盐胁迫的耐受性 | 第98-100页 |
2.4.20 沉默SlMBP8基因促进盐胁迫相关基因的表达 | 第100-102页 |
2.4.21 SlMBP8基因的沉默增强了番茄对干旱胁迫的耐受性 | 第102-104页 |
2.4.22 沉默SlMBP8基因促进脱水胁迫相关基因的表达 | 第104-105页 |
2.5 讨论 | 第105-108页 |
2.5.1 SlMBP8基因在番茄果实成熟中的功能 | 第105-106页 |
2.5.2 SlMBP8基因在非生物胁迫响应中的功能 | 第106-108页 |
2.6 本章小结 | 第108-109页 |
3 番茄SlMBP15基因的功能研究 | 第109-131页 |
3.1 引言 | 第109页 |
3.2 材料、试剂与仪器 | 第109页 |
3.2.1 材料 | 第109页 |
3.2.2 仪器、设备 | 第109页 |
3.2.3 试剂与培养基 | 第109页 |
3.3 实验方法 | 第109-115页 |
3.3.1 SlMBP15基因的克隆 | 第109页 |
3.3.2 SlMBP15基因的生物信息学分析 | 第109页 |
3.3.3 SlMBP15基因的表达模式分析 | 第109-110页 |
3.3.4 SlMBP15基因响应非生物胁迫的表达模式分析 | 第110页 |
3.3.5 SlMBP15基因响应激素处理的表达模式分析 | 第110页 |
3.3.6 SlMBP15沉默载体的构建 | 第110-113页 |
3.3.7 pBIN19- SlMBP15质粒的农杆菌结合转移 | 第113页 |
3.3.8 农杆菌侵染番茄子叶 | 第113页 |
3.3.9 转基因株系的筛选 | 第113页 |
3.3.10 转基因效率鉴定 | 第113页 |
3.3.11 番茄果皮类胡萝卜素含量测定 | 第113页 |
3.3.12 番茄果实乙烯含量测定 | 第113页 |
3.3.13 果实耐储实验 | 第113页 |
3.3.14 实时定量 PCR 分析转基因对成熟相关基因表达量的影响 | 第113页 |
3.3.15 SlMBP15与SlMADS-RIN蛋白互作的研究 | 第113-114页 |
3.3.16 植物內源激素的测定 | 第114页 |
3.3.17 实时定量PCR分析沉默SlMBP15基因对赤霉素相关基因表达量的影响 | 第114-115页 |
3.4 结果与分析 | 第115-129页 |
3.4.1 SlMBP15与其它的MADS-box蛋白的同源比对及系统发育分析 | 第115-116页 |
3.4.2 SlMBP15蛋白氨基酸组成 | 第116-118页 |
3.4.3 SlMBP15蛋白的二级结构 | 第118页 |
3.4.4 SlMBP15蛋白的理化性质分析及亚细胞定位 | 第118页 |
3.4.5 SlMBP15基因启动子富含的顺式元件分析 | 第118-119页 |
3.4.6 SlMBP15基因的表达模式研究 | 第119页 |
3.4.7 SlMBP15沉默转基因株系的培育及筛选 | 第119-120页 |
3.4.8 SlMBP15在沉默株系中的表达 | 第120-121页 |
3.4.9 SlMBP15沉默株系果实的表型及分析 | 第121-122页 |
3.4.10 果实总类胡萝卜素的提取 | 第122-123页 |
3.4.11 果实乙烯合成的测定 | 第123-125页 |
3.4.12 实时定量PCR分析沉默SlMBP15对乙烯合成及信号转导等相关基因的影响 | 第125页 |
3.4.13 SlMBP15与SlMADS-RIN的互作研究 | 第125-126页 |
3.4.14 沉默转基因植株出现矮化的表型 | 第126-128页 |
3.4.15 赤霉素含量测定及相关基因表达水平测定 | 第128-129页 |
3.5 讨论 | 第129-130页 |
3.5.1 SlMBP15基因在番茄果实成熟中的功能 | 第129页 |
3.5.2 SlMBP15基因参与调控赤霉素合成及响应 | 第129-130页 |
3.6 本章小结 | 第130-131页 |
4 番茄FUL1&FUL2基因的功能研究 | 第131-143页 |
4.1 引言 | 第131页 |
4.2 材料、试剂与仪器 | 第131页 |
4.3 实验方法 | 第131-132页 |
4.3.1 FUL1&FUL2基因的表达模式分析 | 第131页 |
4.3.2 沉默载体的构建 | 第131-132页 |
4.4 结果与分析 | 第132-141页 |
4.4.1 FUL1&FUL2蛋白氨基酸组成 | 第132-133页 |
4.4.2 FUL1&FUL2蛋白的二级结构 | 第133-134页 |
4.4.3 FUL1&FUL2蛋白的理化性质分析及亚细胞定位 | 第134-135页 |
4.4.4 FUL1&FUL2基因的表达模式预测分析 | 第135-136页 |
4.4.5 FUL1&FUL2基因的表达模式分析 | 第136-137页 |
4.4.6 沉默转基因果实的表型 | 第137-138页 |
4.4.7 FUL1&FUL2双沉默转基因果实沉默效率检测 | 第138-139页 |
4.4.8 类胡萝卜素的含量测定及关键合成基因的检测 | 第139-140页 |
4.4.9 乙烯含量测定及相关基因表达量的分析 | 第140-141页 |
4.5 讨论 | 第141-142页 |
4.6 本章小结 | 第142-143页 |
5 结论与展望 | 第143-147页 |
5.1 主要结论 | 第143-144页 |
5.2 展望 | 第144-147页 |
致谢 | 第147-149页 |
参考文献 | 第149-165页 |
附录 | 第165-166页 |
A. 作者在攻读博士期间发表的论文目录 | 第165-166页 |
B. 作者在攻读博士期间发明的专利 | 第166页 |