| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-31页 |
| 1.1 脂肪酶的综述 | 第19-20页 |
| 1.2 嗜热脂肪酶 | 第20-21页 |
| 1.3 脂肪酶的活性测定 | 第21-24页 |
| 1.3.1 脂肪酶活性定量测 | 第21-23页 |
| 1.3.1.1 pH计法 | 第22页 |
| 1.3.1.2 滴定法 | 第22-23页 |
| 1.3.1.3 分光光度法 | 第23页 |
| 1.3.2 脂肪酶活性定性测定 | 第23-24页 |
| 1.4 脂肪酶的结构 | 第24-25页 |
| 1.4.1 脂肪酶的催化活性中心 | 第24-25页 |
| 1.4.2 脂肪酶的“盖子”结构 | 第25页 |
| 1.5 有机溶剂对脂肪酶活力的影响 | 第25-26页 |
| 1.6 脂肪酶的应用 | 第26-29页 |
| 1.6.1 脂肪酶应用于食品工业 | 第27页 |
| 1.6.2 脂肪酶应用于洗涤及造纸工业 | 第27页 |
| 1.6.3 脂肪酶应用于医药及化妆品工业 | 第27-28页 |
| 1.6.4 脂肪酶应用于生物柴油的生产 | 第28-29页 |
| 1.7 本课题研究目的和思路 | 第29-31页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第29页 |
| 1.7.2 研究思路 | 第29-31页 |
| 第二章 嗜热脂肪酶的表达及纯化 | 第31-47页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第31-34页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第31页 |
| 2.1.2 培养基及试剂的配制 | 第31-33页 |
| 2.1.3 试剂及仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-39页 |
| 2.2.1 嗜热脂肪酶的表达 | 第34-35页 |
| 2.2.1.1 嗜热脂肪酶基因pET22b-EST质粒的提取 | 第34页 |
| 2.2.1.2 嗜热脂肪酶的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.1.3 蛋白含量的测定 | 第35页 |
| 2.2.2 嗜热脂肪酶的纯化 | 第35-39页 |
| 2.2.2.1 嗜热脂肪酶基因pET22b-EST的基因突变 | 第36-38页 |
| 2.2.2.2 突变基因的表达 | 第38页 |
| 2.2.2.3 酶的纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.2.4 纯化酶凝胶电泳 | 第39页 |
| 2.3 实验结果及讨论 | 第39-46页 |
| 2.3.1 Thermusthermophilus HB8 EST基因的序列分析 | 第39-41页 |
| 2.3.2 嗜热脂肪酶基因的提取 | 第41-42页 |
| 2.3.3 嗜热脂肪酶的蛋白含量的测定 | 第42-43页 |
| 2.3.4 嗜热脂肪酶突变基因pET22b-EST-His的扩增及测序 | 第43-45页 |
| 2.3.5 嗜热脂肪酶突变基因pET22b-EST-His的表达及纯化 | 第45-46页 |
| 2.4 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 酶学性质的测定及表征 | 第47-57页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第47页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第47页 |
| 3.1.2 培养基及试剂的配制 | 第47页 |
| 3.1.3 试剂及仪器 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 酶活测定体系中酶量的确定 | 第47-48页 |
| 3.2.2 酶活方法的确定 | 第48页 |
| 3.2.3 对硝基苯酚标准曲线的测定 | 第48页 |
| 3.2.4 温度对酶活的影响 | 第48页 |
| 3.2.5 热稳定性的测定 | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第49-56页 |
| 3.3.1 酶活测定时酶液量的测定 | 第49-50页 |
| 3.3.2 酶活方法的确定 | 第50-52页 |
| 3.3.3 对硝基苯酚标准曲线的测定以及酶活的测定 | 第52-53页 |
| 3.3.4 温度对酶催化活力的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.5 酶的热稳定性 | 第54-56页 |
| 3.4 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 有机溶剂对EST脂肪酶活力及结构的影响 | 第57-71页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第57页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第57页 |
| 4.1.2 培养基及试剂的配制 | 第57页 |
| 4.1.3 试剂及仪器 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 4.2.1 有机溶剂对酶活的影响 | 第57页 |
| 4.2.2 动力学参数的测定 | 第57-58页 |
| 4.2.3 Thermusthermophilus HB8 EST脂肪酶的同源建模和二级结构分析 | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果及讨论 | 第59-68页 |
| 4.3.1 有机溶剂对酶催化活力的影响以及酶在有机溶剂中的稳定性 | 第59-62页 |
| 4.3.2 在不同条件下的酶的动力学研究 | 第62-65页 |
| 4.3.3 同源建模和蛋白质二级结构的测定 | 第65-68页 |
| 4.4 小结 | 第68-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-75页 |
| 5.1 结论 | 第71-72页 |
| 5.2 展望 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录一 磷酸盐缓冲液配方 | 第79-81页 |
| 附录二 试剂 | 第81-83页 |
| 附录三 仪器 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 研究成果及已发表的学术论文 | 第87-89页 |
| 作者及导师简介 | 第89-90页 |
| 附件 | 第90-91页 |
