| 目录 | 第4-8页 |
| CONTENTS | 第8-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-36页 |
| 1.1 细胞死亡 | 第16-21页 |
| 1.1.1 细胞死亡的主要方式 | 第16-17页 |
| 1.1.2 细胞凋亡的机制 | 第17-18页 |
| 1.1.3 细胞坏死的机制 | 第18-19页 |
| 1.1.4 ROS和细胞死亡 | 第19-21页 |
| 1.1.4.1 ROS简介 | 第19-20页 |
| 1.1.4.2 ROS与细胞死亡的关系 | 第20-21页 |
| 1.2 肿瘤坏死因子(TNF) | 第21-28页 |
| 1.2.1 TNF简介 | 第21页 |
| 1.2.2 TNF-α生物学活性 | 第21-22页 |
| 1.2.3 TNF-α相关信号通路简介 | 第22-28页 |
| 1.2.3.1 肿瘤坏死因子受体(TNFR) | 第22-23页 |
| 1.2.3.2 TNFR相关死亡蛋白(TRADD) | 第23-24页 |
| 1.2.3.3 受体相互作用蛋白(RIP) | 第24-28页 |
| 1.2.3.3.1 RIP1简介 | 第24-25页 |
| 1.2.3.3.2 RIP1与细胞存活和死亡 | 第25页 |
| 1.2.3.3.3 RIP2简介 | 第25-26页 |
| 1.2.3.3.4 RIP2与免疫反应 | 第26页 |
| 1.2.3.3.5 RIP3简介 | 第26-27页 |
| 1.2.3.3.6 RIP3与细胞凋亡和细胞坏死 | 第27-28页 |
| 1.3 细胞坏死相关信号通路 | 第28-33页 |
| 1.3.1 NF-κB通路 | 第28-30页 |
| 1.3.1.1 NF-κBB简介 | 第28-29页 |
| 1.3.1.2 NF-κB信号通路与细胞存活 | 第29-30页 |
| 1.3.2 MAPK通路 | 第30-33页 |
| 1.3.2.1 MAPK简介 | 第30-31页 |
| 1.3.2.2 TNF-α与p38信号通路 | 第31-32页 |
| 1.3.2.3 TNF-α激活JNK信号通路 | 第32-33页 |
| 1.4 TNF-α抑制剂研究现状 | 第33-35页 |
| 1.4.1 TNF-α与疾病 | 第33页 |
| 1.4.2 TNF-α抑制剂种类 | 第33-35页 |
| 1.5 实验内容、目的和意义 | 第35-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-39页 |
| 2.1.1 化合物来源 | 第36页 |
| 2.1.2 细胞株来源 | 第36页 |
| 2.1.3 主要试剂和耗材 | 第36-38页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第38-39页 |
| 2.2 常用试剂配制 | 第39-42页 |
| 2.2.1 细胞培养相关试剂配制 | 第39-42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-51页 |
| 2.3.1 细胞复苏、传代、接种及保藏 | 第42-43页 |
| 2.3.1.1 细胞复苏 | 第42页 |
| 2.3.1.2 细胞传代 | 第42-43页 |
| 2.3.1.3 细胞冻存 | 第43页 |
| 2.3.2 细胞计数 | 第43-44页 |
| 2.3.3 CCK-8法测定细胞存活率 | 第44页 |
| 2.3.4 细胞内活性氧水平检测 | 第44-45页 |
| 2.3.5 Western blot检测 | 第45-46页 |
| 2.3.5.1 细胞总蛋白裂解液制备 | 第45页 |
| 2.3.5.2 SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)电泳和分析 | 第45页 |
| 2.3.5.3 电转移 | 第45页 |
| 2.3.5.4 封闭 | 第45-46页 |
| 2.3.5.5 免疫杂交反应 | 第46页 |
| 2.3.5.6 ECL化学发光显影 | 第46页 |
| 2.3.6 免疫共沉淀(co-IP) | 第46页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR(Real-time qPCR) | 第46-50页 |
| 2.3.7.1 总RNA的提取与纯化 | 第46-48页 |
| 2.3.7.1.1 TRIzol法提取RNA | 第46-47页 |
| 2.3.7.1.2 去DNA组 | 第47-48页 |
| 2.3.7.2 RNA反转录与cDNA合成 | 第48页 |
| 2.3.7.3 引物设计 | 第48-49页 |
| 2.3.7.4 Real-time qPCR | 第49-50页 |
| 2.3.8 核蛋白抽提 | 第50-51页 |
| 第三章 结果与分析 | 第51-71页 |
| 3.1 抗TNF-α活性化合物筛选 | 第51-54页 |
| 3.2 C_2D抑制TNF-α诱导L929细胞的死亡 | 第54-58页 |
| 3.2.1 C_2D对细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 3.2.2 大黄素和C_2D的作用对比 | 第55-58页 |
| 3.3 C_2D机理初探 | 第58-62页 |
| 3.3.1 C_2D可以降低L929细胞因TNF-α的刺激产生的ROS | 第58-59页 |
| 3.3.2 C_2D对NF-κB信号通路的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.3 C_2D对MAPK信号通路的影响 | 第60-62页 |
| 3.4 TNF-α作用机理探究 | 第62-71页 |
| 3.4.1 TNF-α刺激L929细胞引起RIP3的变化 | 第62-64页 |
| 3.4.2 RIP3 RNA水平表达量探究 | 第64-67页 |
| 3.4.2.1 L929细胞总RNA的提取 | 第65页 |
| 3.4.2.2 Real-time qPCR结果 | 第65-67页 |
| 3.4.3 RIP3蛋白水平的探究 | 第67-71页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第71-75页 |
| 4.1 讨论 | 第71-72页 |
| 4.1.1 采用流式细胞术测细胞内ROS的量 | 第71页 |
| 4.1.2 co-IP实验中裂解液的选择 | 第71-72页 |
| 4.1.3 TNF-α试剂的选择 | 第72页 |
| 4.2 实验结果讨论 | 第72-73页 |
| 4.2.1 C_2D抗TNF-α机理的探究 | 第72-73页 |
| 4.2.2 TNF-α作用机理探究 | 第73页 |
| 4.3 结论 | 第73-74页 |
| 4.4 展望 | 第74-75页 |
| 4.4.1 TNF-α拮抗剂机理研究 | 第74页 |
| 4.4.2 C_2D靶点的确定 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
