| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 一、文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 棉纤维生长发育过程及其研究意义 | 第13-15页 |
| 1.1.1 棉纤维发育的研究意义 | 第13页 |
| 1.1.2 棉花纤维的生长发育过程 | 第13-15页 |
| 1.2 蛋白质相互作用的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 酵母双杂交系统的概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 双分子荧光互补技术(BiFC)的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 多不饱和脂肪酸(PUFA)的生物学功能 | 第18-20页 |
| 1.3.1 PUFA与细胞膜的流动性 | 第18-19页 |
| 1.3.2 PUFA与信号转导以及基因表达调控之间的关系 | 第19页 |
| 1.3.3 PUFA与细胞膜的过氧化 | 第19页 |
| 1.3.4 PUFA与棉花纤维细胞发育的关系 | 第19-20页 |
| 1.4 蓝铜蛋白BCP的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.4.1 蓝铜蛋白的概况 | 第20页 |
| 1.4.2 蓝铜蛋白(BCP)的生物学功能 | 第20-21页 |
| 1.4.3 蓝铜蛋白与棉花纤维细胞发育的关系 | 第21-23页 |
| 二、引言 | 第23-27页 |
| 2.1 立论依据 | 第23-25页 |
| 2.2 技术路线 | 第25-27页 |
| 三、材料与方法 | 第27-35页 |
| 3.1 材料 | 第27-29页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 3.1.2 菌株与质粒载体 | 第27页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第27页 |
| 3.1.4 主要试剂与缓冲液配方 | 第27-29页 |
| 3.1.5 实验所用引物 | 第29页 |
| 3.2 方法 | 第29-35页 |
| 3.2.1 棉花胚珠RNA提取 | 第29-30页 |
| 3.2.2 cDNA的合成及文库构建 | 第30页 |
| 3.2.3 诱饵载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.2.4 酵母感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| 3.2.5 诱饵蛋白的自激活及毒力测试 | 第32页 |
| 3.2.6 酵母双杂交筛选 | 第32页 |
| 3.2.7 酵母质粒提取 | 第32-33页 |
| 3.2.8 酵母阳性克隆共转验证 | 第33页 |
| 3.2.9 获得全长目的靶蛋白的基因序列 | 第33页 |
| 3.2.10 双分子荧光载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.11 烟草的瞬时表达 | 第34-35页 |
| 四、结果与分析 | 第35-47页 |
| 4.1 酵母双杂交筛选GhLFAE相互作用蛋白 | 第35-38页 |
| 4.1.1 诱饵载体pGBKT-GhLFAE的构建 | 第35页 |
| 4.1.2 诱饵蛋白的自激活试验 | 第35-36页 |
| 4.1.3 诱饵蛋白毒力测试 | 第36-37页 |
| 4.1.4 棉花纤维cDNA文库的构建以及GhLFAE相互作用蛋白的筛选 | 第37页 |
| 4.1.5 对筛选酵母的AD插入片段进行扩增以及测序分析 | 第37-38页 |
| 4.2 酵母双杂交验证筛选蛋白 | 第38-41页 |
| 4.2.1 酵母共转化试验验证阳性克隆 | 第38-40页 |
| 4.2.2 switch验证筛选蛋白 | 第40-41页 |
| 4.3 GhLFAE相互作用蛋白编码基因的表达分析 | 第41-43页 |
| 4.3.1 靶蛋白的编码基因在陆地棉不同组织中的表达特征分析 | 第41-42页 |
| 4.3.2 靶蛋白的编码基因在陆地棉胚珠不同发育时期的表达特征分析 | 第42页 |
| 4.3.3 靶蛋白的编码基因在棉花纤维不同发育时期的表达分析 | 第42-43页 |
| 4.4 BIFC验证GhLFAE的相互作用蛋白 | 第43-47页 |
| 五、讨论 | 第47-51页 |
| 5.1 酵母双杂交筛选GhLFAE相互作用蛋白 | 第47-48页 |
| 5.2 双分子荧光互补验证蛋白间的相互作用 | 第48页 |
| 5.3 GhLFAE调控棉花纤维发育的作用假设 | 第48-51页 |
| 六、结论 | 第51-53页 |
| 6.1 酵母双杂交筛选与GhLFAE相互作用的蛋白 | 第51页 |
| 6.2 筛选出的靶蛋白编码基因在陆地棉中的表达模式分析 | 第51页 |
| 6.3 GhBCP2与GhLFAE的BIFC验证 | 第51-53页 |
| 七、参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
