| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词与专有名词明细 | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 植物半胱氨酸蛋白酶概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 木瓜蛋白酶 | 第11-13页 |
| 1.1.2 豆类天冬氨酸蛋白内切酶 | 第13页 |
| 1.1.3 天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶 | 第13-14页 |
| 1.2 半胱氨酸蛋白酶在植物中的作用 | 第14-18页 |
| 1.2.1 PCD概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 半胱氨酸蛋白酶与PCD的关系 | 第15-16页 |
| 1.2.3 叶衰老中的半胱氨酸蛋白酶 | 第16-18页 |
| 1.3 本实验室对半胱氨酸蛋白酶研究现状 | 第18-19页 |
| 1.4 研究意义 | 第19-20页 |
| 2 半胱氨酸蛋白酶基因家族的序列分析与克隆 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 实验主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 毛果杨半胱氨酸蛋白酶家族的序列克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.1 毛果杨基因数据库JGI的检索 | 第21页 |
| 2.2.2 毛果杨总RNA的提取及cDNA的获得 | 第21页 |
| 2.2.3 特异引物的序列扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.4 半胱氨酸蛋白酶基因克隆的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3 毛果杨半胱氨酸蛋白酶家族的序列分析 | 第23-24页 |
| 2.4 结果与分析 | 第24-34页 |
| 2.4.1 毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因家族的可能成员 | 第24-25页 |
| 2.4.2 毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因家族的特异引物PCR扩增 | 第25-29页 |
| 2.4.3 PtCP1的序列分析 | 第29-34页 |
| 3 PtCP1的载体构建、表达与纯化 | 第34-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 3.1.2 实验主要仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第34-35页 |
| 3.2 PtCP1的表达载体构建 | 第35-36页 |
| 3.2.1 扩增表达片段 | 第35页 |
| 3.2.2 表达片段的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 构建pET30a表达载体 | 第36页 |
| 3.3 重组PtCP1的表达与纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.1 重组PtCP1的表达 | 第36页 |
| 3.3.2 重组PtCP1的纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测 | 第37页 |
| 3.4 蛋白质含量的测定 | 第37-38页 |
| 3.4.1 蛋白质含量标准曲线的测定 | 第37-38页 |
| 3.4.2 样品蛋白质含量的测定 | 第38页 |
| 3.5 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.5.1 PtCP1载体构建与双酶切 | 第38-40页 |
| 3.5.2 PtCP1蛋白与纯化结果 | 第40-41页 |
| 3.5.3 蛋白含量的测定 | 第41-42页 |
| 4 PtCP1的酶学活性研究 | 第42-49页 |
| 4.1 实验试剂 | 第42页 |
| 4.2 酶活性的获得 | 第42-43页 |
| 4.2.1 纯化蛋白的复性 | 第42-43页 |
| 4.2.2 复性蛋白酶的酸化 | 第43页 |
| 4.3 最适反应条件的确定 | 第43-44页 |
| 4.3.1 最适反应温度确定 | 第43页 |
| 4.3.2 最适反应pH的确定 | 第43-44页 |
| 4.3.3 酪氨酸标准曲线的测定 | 第44页 |
| 4.4 Km值及Vm值的测定 | 第44页 |
| 4.5 特异性抑制剂对酶活性的影响 | 第44-45页 |
| 4.6 结果与分析 | 第45-49页 |
| 4.6.1 酶活性的获得 | 第45页 |
| 4.6.2 酪氨酸标准曲线的确定与酶IU的计算 | 第45-46页 |
| 4.6.3 最适反应条件的确定 | 第46-48页 |
| 4.6.4 Km值及Fm值的测定 | 第48页 |
| 4.6.5 特异性抑制剂对酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 5 结论与讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 导师简介 | 第56-57页 |
| 获得成果目录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
