| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-18页 |
| 1.1 奶牛泌乳功能基因研究 | 第13页 |
| 1.2 FABP3基因的研究 | 第13-15页 |
| 1.2.1 概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 生物学功能 | 第14页 |
| 1.2.3 临床应用 | 第14-15页 |
| 1.3 乳脂合成信号转导通路中重要分子的研究 | 第15-16页 |
| 1.3.1 SREBP 1 | 第15页 |
| 1.3.2 PPARγ | 第15-16页 |
| 1.3.3 长链脂肪酸 | 第16页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 乳腺组织总RNA提取 | 第18页 |
| 2.1.1 实验耗材和仪器 | 第18页 |
| 2.1.2 乳腺组织处理 | 第18页 |
| 2.1.3 RNA的提取 | 第18页 |
| 2.1.4 质量检测 | 第18页 |
| 2.2 功能基因筛选及qRT-PCR验证 | 第18-21页 |
| 2.2.1 设计引物 | 第19页 |
| 2.2.2 cDNA合成 | 第19-20页 |
| 2.2.3 qRT-PCR验证 | 第20页 |
| 2.2.4 引物效果验证 | 第20-21页 |
| 2.3 奶牛乳腺上皮细胞培养 | 第21-22页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.3.2 实验仪器 | 第22页 |
| 2.3.3 细胞原代培养 | 第22页 |
| 2.3.4 细胞传代培养及纯化鉴定 | 第22页 |
| 2.4 FABP3基因过表达 | 第22-28页 |
| 2.4.1 引物设计及PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.4.2 构建pMD18-T-FABP3克隆载体 | 第23-24页 |
| 2.4.3 构建pGCMV/IRES/EGFP/FABP3真核表达载体 | 第24页 |
| 2.4.4 重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞 | 第24-25页 |
| 2.4.5 qRT-PCR检测 | 第25页 |
| 2.4.6 Western blotting检测 | 第25-27页 |
| 2.4.7 免疫荧光染色法检测 | 第27-28页 |
| 2.5 FABP3基因沉默 | 第28-29页 |
| 2.5.1 实验材料和仪器 | 第28页 |
| 2.5.2 细胞转染 | 第28页 |
| 2.5.3 qRT-PCR检测 | 第28页 |
| 2.5.4 Western blotting检测 | 第28-29页 |
| 2.5.5 免疫荧光染色法检测 | 第29页 |
| 2.6 外源脂肪酸添加试验 | 第29-31页 |
| 2.6.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.6.2 脂肪酸溶液的制备 | 第29页 |
| 2.6.3 qRT-PCR筛选脂肪酸作用最佳浓度和时间 | 第29-30页 |
| 2.6.4 Western blotting检测 | 第30页 |
| 2.6.5 免疫荧光染色法检测 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-53页 |
| 3.1 奶牛乳腺组织RNA提取结果 | 第31-32页 |
| 3.2 qRT-PCR验证FABP3基因 | 第32-34页 |
| 3.3 细胞培养 | 第34-35页 |
| 3.3.1 原代和传代细胞 | 第34页 |
| 3.3.2 乳腺上皮细胞鉴定 | 第34-35页 |
| 3.4 FABP3基因过表达功能检验结果 | 第35-42页 |
| 3.4.1 FABP3基因PCR结果 | 第35页 |
| 3.4.2 FABP3基因克隆载体 | 第35-36页 |
| 3.4.3 FABP3基因真核表达载体 | 第36-37页 |
| 3.4.4 FABP3基因过表达 | 第37-38页 |
| 3.4.5 mRNA表达水平检测 | 第38-39页 |
| 3.4.6 蛋白质表达水平检测 | 第39-40页 |
| 3.4.7 蛋白质定位及脂滴形成检测 | 第40-42页 |
| 3.5 FABP3基因沉默检验结果 | 第42-47页 |
| 3.5.1 FABP3基因干扰 | 第42-43页 |
| 3.5.2 mRNA表达水平检测 | 第43-44页 |
| 3.5.3 蛋白质表达水平检测 | 第44页 |
| 3.5.4 蛋白质定位及脂滴形成检测 | 第44-47页 |
| 3.6 脂肪酸作用效果检测 | 第47-53页 |
| 3.6.1 脂肪酸作用最佳浓度和时间筛选结果 | 第47-49页 |
| 3.6.2 蛋白质表达水平检测 | 第49-50页 |
| 3.6.3 蛋白质定位及脂滴形成检测 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 4.1 SREBP1与FABP3关系探讨 | 第53页 |
| 4.2 PPARγ与FABP3关系探讨 | 第53-54页 |
| 4.3 长链脂肪酸与FABP3关系探讨 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
