| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第5-11页 |
| 绪论 | 第11-21页 |
| 1 伪狂犬病病毒概述 | 第11-14页 |
| 1.1 病毒结构 | 第11-12页 |
| 1.2 主要毒力基因 | 第12-13页 |
| 1.3 基因缺失弱毒疫苗 | 第13页 |
| 1.4 PRV与免疫 | 第13-14页 |
| 2 先天免疫 | 第14-17页 |
| 2.1 TLRs介导的抗病毒天然免疫信号通路 | 第15-16页 |
| 2.2 RLH介导的抗病毒天然免疫信号通路 | 第16页 |
| 2.3 NLR及AIM2介导的抗病毒天然免疫信号通路 | 第16页 |
| 2.4 ERIS介导的抗病毒天然免疫信号通路 | 第16-17页 |
| 3 CRISPR/Cas9系统概述 | 第17-19页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9发现背景 | 第17页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9系统分子机制 | 第17-19页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9系统应用 | 第19页 |
| 4 研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第一章 CRISPR/Cas9系统构建敲除细胞株 | 第21-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 1.1.1 细胞系 | 第21页 |
| 1.1.2 主要溶液的配置 | 第21-22页 |
| 1.1.3 主要试剂与耗材 | 第22-23页 |
| 1.1.4 主要实验设备 | 第23-24页 |
| 1.1.5 菌株和载体 | 第24页 |
| 1.1.6 sgRNA设计 | 第24-25页 |
| 1.1.7 敲除细胞株测序验证引物 | 第25页 |
| 1.2 实验方法 | 第25-37页 |
| 1.2.1 PX459-p-sgRNA重组载体构建 | 第25-29页 |
| 1.2.2 敲除质粒的转染 | 第29-31页 |
| 1.2.3 筛选抗性细胞株 | 第31页 |
| 1.2.4 敲除细胞的初步筛选 | 第31-33页 |
| 1.2.5 敲除细胞的二次筛选 | 第33页 |
| 1.2.6 基因组提取 | 第33-34页 |
| 1.2.7 细胞总蛋白含量测定 | 第34-35页 |
| 1.2.8 Westen-blot验证敲除细胞株 | 第35-37页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第37-46页 |
| 1.3.1 PX459-p-sgRNA重组质粒的鉴定 | 第37-39页 |
| 1.3.2 重组质粒的转染效率验证 | 第39页 |
| 1.3.3 Puromycin筛选浓度的确定 | 第39-40页 |
| 1.3.4 敲除细胞株的筛选及鉴定 | 第40-43页 |
| 1.3.5 敲除细胞株的二次鉴定 | 第43-45页 |
| 1.3.6 敲除细胞株的蛋白鉴定 | 第45-46页 |
| 1.4 小结 | 第46-49页 |
| 第二章 PRV与细胞先天免疫应答 | 第49-69页 |
| 2.1 村料 | 第49-51页 |
| 2.1.1 细胞 | 第49页 |
| 2.1.2 毒株 | 第49页 |
| 2.1.3 试剂及耗材 | 第49页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第49-50页 |
| 2.1.5 qRT-PCR引物、以及双基因敲除毒株 | 第50-51页 |
| 2.2 方法 | 第51-55页 |
| 2.2.1 细胞传代 | 第51-52页 |
| 2.2.2 病毒的扩增和收获 | 第52页 |
| 2.2.3 病毒的纯化 | 第52页 |
| 2.2.4 病毒TCID50的测定 | 第52-53页 |
| 2.2.5 病毒侵染的细胞总RNA的提取 | 第53页 |
| 2.2.6 总RNA逆转录 | 第53-54页 |
| 2.2.7 cDNA的Real-time PCR | 第54-55页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第55-67页 |
| 2.3.1 病毒的纯化及TCID50 | 第55-56页 |
| 2.3.2 猪PRV病毒诱导pk-15细胞病变 | 第56-61页 |
| 2.3.3 病毒感染pk-15细胞免疫应答 | 第61-67页 |
| 2.4 小结 | 第67-69页 |
| 第三章 分析结果 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 个人简历 | 第79-83页 |
