中文摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
缩略语表 | 第10-12页 |
第一部分 HIV-1宿主限制因子APOBEC3F包装进入病毒颗粒机制以及与APOBEC3G相关比较 | 第12-38页 |
前言 | 第12-16页 |
实验材料 | 第16-19页 |
1. 细胞系 | 第16页 |
3. 细胞培养基和生化试剂 | 第16-17页 |
4. 试剂盒 | 第17页 |
5. 抗体 | 第17页 |
6. 质粒 | 第17-18页 |
7. 主要实验仪器 | 第18-19页 |
实验方法 | 第19-21页 |
1. 细胞培养及转染 | 第19页 |
2. 病毒或病毒类似颗粒的超速离心分离 | 第19页 |
3. 免疫印迹(Western Blot) | 第19-20页 |
4. 免疫共沉淀(Co-IP) | 第20-21页 |
实验结果 | 第21-34页 |
1. 病毒颗粒及类病毒颗粒VLPs的APOBEC3F包装 | 第21-22页 |
2. APOBEC3F与Gag及其截短突变体相互作用研究 | 第22-24页 |
3. APOBEC3F与Gag NC突变体作用研究 | 第24-25页 |
4. APOBEC3F突变体对包装进入病毒颗粒的影响 | 第25-27页 |
5. 细胞或病毒RNA在APOBEC3F/G包装过程中辅助作用研究 | 第27-28页 |
6. APOBEC3F和APOBEC3G病毒包装机制比较 | 第28-30页 |
7. Gag NC结构域突变体对APOBEC3F和APOBEC3G包装的影响 | 第30-34页 |
讨论 | 第34-38页 |
第二部分 APOBEC3F与HIV-1逆转录酶相互作用的抗病毒机制研究 | 第38-60页 |
前言 | 第38-42页 |
实验材料 | 第42-45页 |
1. 细胞系 | 第42页 |
2. 常用试剂 | 第42页 |
4. 试剂盒 | 第42-43页 |
5. 抗体 | 第43页 |
6. 质粒 | 第43页 |
7. 主要实验仪器 | 第43-45页 |
实验方法 | 第45-50页 |
1. 质粒构建 | 第45-46页 |
2. 细胞培养及转染 | 第46页 |
3. 细胞基因组提取 | 第46页 |
4. 免疫印迹(Western Blot) | 第46页 |
5. 定量PCR(realtime PCR)检测 | 第46-48页 |
6. HIV假型病毒的生产以及感染细胞 | 第48页 |
7. 病毒p24抗体的定量检测 | 第48页 |
8. 病毒感染性测定 | 第48-49页 |
9. 免疫共沉淀(Co-IP) | 第49-50页 |
实验结果 | 第50-58页 |
1. 定量PCR分析APOBEC3F抑制HIV-1病毒复制 | 第50-51页 |
2. 逆转录酶与APOBEC3F相互作用的研究 | 第51-52页 |
3. 确定逆转录酶和APOBEC3F作用的关键区域 | 第52-53页 |
4. APOBEC3F与RT作用关键区域的确定 | 第53-55页 |
5. APOBEC3F与RT作用关键区域抑制HIV-1活性研究 | 第55-57页 |
6. 核酸分子对APOBEC3F与RT作用的影响 | 第57-58页 |
讨论 | 第58-60页 |
第三部分 APOBEC3F与HIV-1 Vif相互作用研究 | 第60-72页 |
实验材料 | 第61-64页 |
1. 细胞系 | 第61-62页 |
2. 常用生化试剂 | 第62页 |
4. 试剂盒 | 第62页 |
5. 抗体 | 第62-63页 |
6. 质粒 | 第63页 |
7. 主要实验仪器 | 第63-64页 |
实验方法 | 第64-66页 |
1. 质粒构建 | 第64-65页 |
2. 细胞培养及转染 | 第65页 |
3. 免疫印迹(Western Blot) | 第65页 |
4. 免疫共沉淀(Co-IP) | 第65-66页 |
实验结果 | 第66-71页 |
1. APOBEC3F与Vif作用模拟结构建立及关键位点预测 | 第66-68页 |
2. APOBEC3F点突变抗Vif降解作用验证 | 第68-69页 |
3. APOBEC3F点突变与Vif相互作用分析 | 第69-71页 |
讨论 | 第71-72页 |
参考文献 | 第72-78页 |
宿主功能因子对丙型肝炎病毒感染作用研究进展 | 第78-95页 |
参考文献 | 第86-95页 |
致谢 | 第95-96页 |